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目的研究自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-II在缺血预处理后不同时间间隔大鼠脑缺血再灌注海马中的表达,探讨自噬在脑缺血预处理神经保护作用的可能机制。方法1.健康雄性SD大鼠50只随机分为3组:假手术组、缺血再灌注组、缺血预处理组,缺血预处理组再按不同缺血预处理间隔时间分为24h、72h、5d3个亚组。2.参照Zea-Longa线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血预处理和缺血再灌注模型。3.利用TTC染色、photoshop图像分析法、HE染色、免疫组织化学染色、观察脑梗死体积、海马神经细胞病理变化、海马神经细胞自噬相关蛋白Beclin-1及LC3-II表达的情况。4.透射电镜观察神经细胞中自噬超微结构的变化。5.比较各组神经功能缺失、脑梗死体积、海马神经细胞病理变化、海马神经细胞自噬相关蛋白Beclin-1及LC3-II表达、自噬体和各级溶酶体数量。6.以Excel数据库整理后采用SPSS17.0统计学软件进行数据分析,所得数据均以x±s表示,P<0.05认为差异有统计学意义。采用Microsoft Excel软件作图。结果1.缺血预处理组神经功能缺失症状较缺血再灌注组有所改善,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.与缺血再灌注组相比,缺血预处理组脑梗死体积缩小,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.HE染色可见假手术组神经细胞无损伤;与缺血再灌注组相比,缺血预处理各亚组海马神经细胞损伤减轻。4.与假手术组相比,缺血再灌注组、缺血预处理组Beclin-1的表达均明显增强,差异具有统计学意义(P<0.05);缺血预处理组与缺血再灌注组比较,可见Beclin-1阳性细胞数减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。5.假手术组只见极少量LC3-II阳性细胞表达,而在缺血再灌注组及缺血预处理组均可见大量LC3-II阳性细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。缺血预处理各亚组LC3-II阳性细胞表达显著低于缺血再灌注组,差异有统计学意义(P<0.05)。6.透射电镜下缺血预处理组及缺血再灌注组均可见数量不等、处于不同期间的自噬体和自噬溶酶体,其数量在缺血预处理组明显减少。7.缺血预处理72h亚组相比较24h亚组和5d亚组脑梗死体积缩小(P<0.05),海马神经细胞损伤减轻,Beclin-1、LC3-II阳性细胞数不同程度减少(P<0.05),自噬体的形成和溶酶体的激活减少。结论1.采用改良后Zea-Longa线栓法制作的大鼠大脑中动脉缺血预处理和缺血再灌注模型方法简便、安全、数据可靠。2.缺血预处理可减低缺血再灌注24小时后大鼠神经功能障碍评分、脑梗死体积、海马神经细胞损伤,对缺血再灌注后神经细胞损伤具有保护作用。3.缺血预处理可能通过下调缺血再灌注24小时后自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-II的表达,以减少缺血再灌注损伤神经细胞的自噬性死亡,减轻神经功能缺损症状,缩小脑梗死体积,从而发挥其脑保护作用。4.缺血预处理72h亚组脑梗死体积低于缺血预处理24h、5d亚组,Beclin-1、LC3-II阳性细胞数低于缺血预处理24h、5d亚组,偶见自噬体,各级溶酶体数量相对较少,提示最佳预处理诱导时间间隔为72h。