鲜食蔬菜的食源性致病菌污染已成为全球普遍关注的热点问题。为了有效监控食源性致病菌污染、降低其对人类健康的危害、保障我国农产品消费安全,有必要进行快速、可靠的检测鉴定技术的研究。然而,现有的食源性致病菌检测鉴定方法存在处理步骤复杂、工作量大、检测鉴定周期长等诸多缺点,不能完全满足简单、快速、高通量的检测要求。目前,基于基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术的分析方法为食源性致病菌的检测鉴定提供了新思路。但是在鲜食蔬菜中,此技术的应用尚处于起步阶段。因此本文针对其关键前处理技术及质谱影响因素进行了初步探索,诣在建立一种适合鲜食蔬菜中食源性致病菌检测鉴定的快速、可靠、高通量方法,且利用所建立的方法对鲜食蔬菜中的病原菌污染状况进行了初步分析。本实验主要研究结果如下:1.以大肠杆菌、大肠杆菌O157:H7、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌的标准菌株为模式菌,考察了基质溶液配比,菌株培养条件,溶剂处理方法,点样方法及比例等条件对质谱鉴定结果的影响,最终确定了用BHI培养基24h培养菌株,以70%甲酸和等量乙腈提取细菌蛋白,样品溶液和基质溶液以覆盖法1μL+1μL点样分析,基质溶液选择体积比为19:20:1的水、乙腈、三氟乙酸三者混合溶液的α-氰-4-羟基肉桂酸(CHCA)饱和溶液作为所有菌株的前处理方法。不同浓度菌液经处理后的鉴定结果显示,本方法检测限为106~109 cfu/mL;稳定性实验结果显示,相同菌株的鉴定结果一致,平均得分均大于95%,变异系数均小于5%。表明该方法满足一般增菌培养之后的病原菌检测需求,且稳定性和重复性均较好。2、分别用所建立的MALDI-TOF MS方法和16S rRNA基因测序法对7株标准菌株和93株分离株进行了分析,以此验证MALDI-TOF MS的可靠性。结果表明MALDI-TOF MS在94%属水平、83%种水平上与16S rRNA基因测序鉴定结果一致。对于其中的56株食源性致病菌分离株,MALDI-TOF MS可做到100%属水平、96.4%种水平与16S rRNA基因测序鉴定结果的一致性。3.用传统增菌及分离培养结合MALDI-TOF MS法检测了200份鲜食果蔬中的常见食源性致病菌及其他潜在病原菌。结果在其中的69份样品中分离到了82株常见食源性致病菌,其中包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特菌、蜡样芽胞杆菌。且分离到了包括奇异变形杆菌、铜绿假单胞菌、粪肠球菌等与食物中毒有关的其他潜在病原菌。表明我国鲜食蔬菜的微生物污染状况值得引起重视。