【摘 要】
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日本黑毛和牛因肉质具有明显的大理石花纹以及含有丰富的不饱和脂肪酸而世界闻名,具有极高的经济和肉用价值。动物体内有精确的氨基酸识别系统,可调控动物的摄食行为。味觉受体3（Tas1R3）是味觉受体第一家族的成员,它可以与Tas1R1相互结合形成异源二聚体,起到识别氨基酸的作用,并参与消化道中氨基酸吸收的调控。TRPM5是哺乳动物瞬时受体电位通道家族的成员,它与味觉受体Tas R家族成员共表达,是Tas
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日本黑毛和牛因肉质具有明显的大理石花纹以及含有丰富的不饱和脂肪酸而世界闻名,具有极高的经济和肉用价值。动物体内有精确的氨基酸识别系统,可调控动物的摄食行为。味觉受体3（Tas1R3）是味觉受体第一家族的成员,它可以与Tas1R1相互结合形成异源二聚体,起到识别氨基酸的作用,并参与消化道中氨基酸吸收的调控。TRPM5是哺乳动物瞬时受体电位通道家族的成员,它与味觉受体Tas R家族成员共表达,是Tas1R1/Tas1R3受体下游信号的关键传导部件之一。而消化道中氨基酸吸收主要是以小肽的形式,依赖于肽转运蛋白1（PepT1）。消化道不同组织中的氨基酸受体和肽转运蛋白的数量和类型的差异可能对氨基酸的识别和小肽的吸收有影响。因此,本研究主要通过荧光定量RT-PCR、免疫组织化学、免疫荧光等方法测定日本黑毛和牛消化道不同组织中Tas1R3基因和PepT1基因的mRNA表达模式和蛋白表达情况,以便为分析黑毛和牛体内饲料蛋白吸收规律以及饲料配方中氨基酸的平衡提供理论依据,也期望通过配制营养合理的日粮改善黑毛和牛的繁殖性能。具体试验结果如下:1.研究了日本黑毛和牛消化道不同组织中Tas1R3基因和PepT1基因的mRNA表达情况。使用荧光定量RT-PCR分别对日本黑毛和牛消化道不同组织（舌、瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃、小肠、盲肠、直肠）中Tas1R3及PepT1基因mRNA表达水平进行分析。首次检测到Tas1R3基因及PepT1基因的mRNA在日本黑毛和牛消化道不同组织中均有表达,Tas1R3基因mRNA的相对表达量由高到低依次为瘤胃,瓣胃,盲肠,网胃,皱胃,小肠,舌头和直肠。PepT1基因mRNA的相对表达量由高到低依次为瘤胃,瓣胃,网胃,小肠,舌头,盲肠,皱胃和直肠。通过LSD多重分析发现:Tas1R3基因和PepT1基因的mRNA表达量在日本黑毛和牛消化道不同组织之间存在显著差异（P＜0.05）。2.探讨了日本黑毛和牛瘤胃和瓣胃组织中Tas1R3受体蛋白和TRPM5离子通道蛋白表达情况。通过免疫组化的方法检测Tas1R3受体蛋白的表达情况,首次发现了Tas1R3受体蛋白在瘤胃和瓣胃组织中表达;通过免疫荧光方法检测TRPM5离子通道蛋白的表达情况,首次发现了TRPM5离子通道蛋白也在瘤胃和瓣胃中表达。以上结果表明:（1）Tas1R3和PepT1基因在日本黑毛和牛胃肠道不同组织中均有表达,并且其表达量在消化道不同组织中表现出明显的差异性。（2）日本黑毛和牛瘤胃和瓣胃组织中存在Tas1R3味觉受体蛋白和TRPM5离子通道蛋白。
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