作为肉鸡骨骼肌的主要组成部分,胸肌组织发育对肉鸡生产效率有着重要的影响。肌内脂肪(Intramuscular fat,IMF)是影响肉品质的关键指标之一,鸡的IMF无法从肌肉组织中直接分离出来,传统转录组得到IMF基因的表达易受肌肉细胞的干扰。因此,本研究利用单细胞RNA测序技术,检测两个不同发育阶段的胸肌组织,分析其异质性和细胞组成,筛选和鉴定IMF特异性表达基因,开发相关分子标记,为鸡肉品质分子机制的研究奠定基础。试验一鸡不同发育阶段胸肌细胞亚群及IMF特异基因鉴别。以生长早期5日龄(D5)和生长快速期100日龄(D100)的京星黄鸡IMF上选系为素材,分别提取胸肌组织原代肌细胞和IMF细胞,进行10×Genomics单细胞RNA测序。测序结果基于基因表达相似性进行分群,鉴定到D5胸肌组织共有10个细胞亚群,D100共有7个细胞亚群。D5胸肌组织中,亚群0、1、3、5、6为成肌细胞群;2和8两个亚群为脂肪细胞亚群,亚群4为红细胞群。而在D100组织中,仅鉴定到一个肌细胞群(cluster3)和一个脂肪细胞群(cluster4)。除此外D100中亚群0为红细胞群,亚群2为内皮细胞群,亚群5为卫星细胞群。比较分析两发育阶段成肌细胞群和脂肪细胞群,发现了肌细胞的Myf5,NRXN1,RASD1和FGFR4等与肌肉组织发育等生物学过程相关的基因,可作为成肌细胞的标记候选基因,IMF细胞中APOA1和ENSGALG00000036073等19个基因与IMF的代谢和转运等生物学过程有关,可作为IMF细胞的标记候选基因。通过研究不同发育阶段肌肉细胞和IMF细胞的细胞组成,丰富了鸡骨骼肌的异质性信息。试验二鸡胸肌IMF候选基因验证。分别以上市日龄京星黄鸡(98日龄)和科宝肉鸡(42日龄)为素材。依据胸肌甘油三酯(TG)含量,区分高低表型组。利用qPCR检测15个与IMF沉积相关的候选基因在组间的表达差异。结果表明,在京星黄鸡和科宝肉鸡TG高低组之间分别有11个和8个表达差异显著的基因(P<0.05);其中ADIPOQ,APOA1,FKTN,HAT1,HS3ST5,MED4,TNIP1等7个基因在两个品种中差异表达趋势一致,可作为IMF沉积的重要候选基因进行后续的分子标记检测。进一步地与单细胞测序筛选结果进行联合分析,共筛选出3个IMF细胞候选标记基因,包括已知的脂肪细胞标志性基因ADIPOQ和新的APOA1和ENSGALG00000036073基因。分别以5日龄和66日龄京星黄鸡胸肌组织为试验材料,利用RNA原位杂交技术验证其在组织中的表达水平和空间异质性。结果表明这三个基因在胸肌组织中的细胞外基质和细胞膜表达,且存在大量共定位,APOA1和ENSGALG00000036073可作为鸡IMF相关的特异性分子标记。