目的：研究紫外线辐射对体外培养的角质形成细胞的影响，包括对角质形成细胞增殖、凋亡和死亡的影响，以及与凋亡相关的bcl-2和Fas基因之间的关系；对角质形成细胞分泌炎症性细胞因子IL-6和表达核因子-κB(NF-κB)的影响；以及紫外线辐射后表皮角质形成细胞产生的细胞因子IL-6对真皮成纤维细胞产生基质金属蛋白酶MMP-1和MMP-3的间接影响。研究具有抗氧化、抗炎作用的绿茶中的主要活性成分表没食子儿茶酚没食子酸酯(EGCG)对紫外线辐射造成角质形成细胞损伤的保护作用。研究NF-κB、表皮生长因子受体(EGF-R)反义寡核苷酸分别转染体外培养的表皮角质形成细胞株HaCaT后，对紫外线诱导的表皮角质形成细胞分泌炎症因子IL-6的抑制作用和转录因子c-jun活性的抑制作用。通过这一系列紫外线辐射对表皮角质形成细胞影响的研究，进一步明确紫外线引起皮肤光老化的分子机制，以期探讨防治紫外线引起皮肤光老化的新途径。 方法：MTT法测定细胞增殖，流式细胞仪检测凋亡和死亡细胞数量以及bcl-2蛋白水平的变化，ELISA方法测定细胞培养上清液中IL-6、Pro-MMP-1、MMP-3蛋白含量和c-jun DNA结合活性，半定量RT-PCR检测mRNA的表达水平，免疫组化和Western Blot检测细胞中NF-κB p65。 结果：1.21mJ／cm~2UVB辐射即对角质形成细胞增殖产生抑制作用，42mJ／cm~2UVB和1.98J／cm~2UVA对角质形成细胞株HaCaT和真 南京医科大学博士学位论文皮成纤维细胞增殖均可产生抑制作用，终浓度为0.1雌恤L的茶多酚对此起到了明显的保护作用。2.对角质形成细胞的进一步研究结果发现，不同剂量的UVB辐射显著增加凋亡和死亡细胞数量，与凋亡相关的bel一2和FaS的表达也产生了显著变化。1 26mJ/cmZUVB辐射组凋亡细胞数低于42mJ/cm“辐射组，但死亡细胞比例显著增加，两组bcl一2和FaS mRNA表达量差异均无显著性。UVB辐射42 mJ/cmZ立即加入EGCG组较辐射42 mJ/c衬未加EGCG组凋亡和死亡数降低，bcl一2增加，FaS mRNA表达量减少。3.uvBZo、3omJ/emZ和U丫A10、20J/c时可以显著增加角质形成细胞内盯一KB表达，促进角质形成细胞分泌IL一6。4.IL一6(8、16、24Pg/mL)可以显著增加真皮成纤维细胞产生MMP一1和M五江p一3。但UVB 30mJ/cmZ辐射后角质形成细胞分泌的pro一MMP一1和MMP一3并未增加，真皮成纤维细胞合成和分泌MMP一1和MMP一3 mRNA含量和蛋白水平均显著增加。5.O.3mM的EGCG对紫外线辐射引起的角质形成细胞凋亡、死亡、表达NF一KB、分泌IL一6均起到了抑制作用，但对IL一6刺激成纤维细胞产生M五江P一1和MMP一3并未产生影响。6.不同浓度的N-F一K B p65反义寡核普酸转染角质形成细胞后对30mJ/c mZuvB诱导的p65mRNA表达和IL一6分泌均有显著抑制作用。不同浓度的EGF一R反义寡核普酸转染后对3OmJ/c澎UVB诱导的EGF一R mRNA表达和c一un活性均有显著抑制作用。 结论:紫外线辐射对细胞具有明显的损伤，小剂量UVB辐射可以诱导体外培养的角质形成细胞凋亡，大剂量UVB辐射则导致细胞 南京医科大学博士学位论文死亡。紫外线辐射后，角质形成细胞NF一KB激活，易位到细胞核，并且促进IL一6的分泌，IL一6可促进成纤维细胞产生MMP。具有抗氧化作用的EGCG对此起着保护作用，提示杭氧化可能是防治紫外线损伤皮肤的一条重要途径。脂质体介导的反义寡核普酸转染角质形成细胞研究结果还表明，脂质体介导的反义寡核普酸可以作为研究紫外线引起皮肤损伤机制的一种手段，并且对紫外线引起皮肤损伤的防治可能有着应用前景。