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胰腺癌(pancreatic adenocarcinomas)是一种恶性消化系统肿瘤,其起病隐匿,早期诊断困难,发现时往往已处于癌症晚期,且其预后不良。在我国的发病率逐年增高。治疗胰腺癌的首选手段是手术切除,但仅有20%左右的病人能接受,目前化疗仍是治疗胰腺癌的主要手段。吉西他滨,一种核苷类似物,是治疗胰腺癌的标准一线药物,但其疗效十分有限。因此,寻找新的治疗方法成为治疗胰腺癌的迫切需要。细胞周期检验点激酶1(checkpoint kinase 1,CHK1)是DNA损伤应答(DNA damage response,DDR)通路中的关键蛋白之一,其参与调控已明确的所有周期检验点、DNA损伤修复、细胞周期进程和细胞凋亡。当细胞受到内源或外源的刺激,产生DNA损伤时,CHK1活化,磷酸化CDC25A和CDC25C磷酸酶,使其降解或游离出细胞核,从而无法活化CDK1和CDK2。阻止细胞周期的进程,为细胞中DNA的修复提供时间。越来越多的实验表明,以DDR通路为靶点的药物可以增强细胞对DNA损伤药的敏感性。本论文选择了一种新型的CHK1抑制剂LY2603618,观察它单独用药或与DNA损伤药物吉西他滨联合用药对胰腺癌细胞的杀伤作用。首先,我们研究了LY2603618单独用药对胰腺癌细胞的杀伤作用及分子机制。结果表明LY2603618能明显地抑制遗传背景不同的五株胰腺癌细胞的生长,但仅能诱导少部分细胞死亡,并阻滞细胞在S期和G2/M期。接下来我们发现LY2603618可以抑制CHK1-CDC25-CDK信号通路的活性,诱导DNA损伤的发生。这些结果说明,LY2603618对细胞检验点有两个方面的作用:抑制CHK1引起细胞周期的运行和因诱导DNA损伤导致的周期检验点的激活。由周期发生阻滞,推论出LY2603618对细胞周期检验点的净影响是诱导DNA损伤导致的周期检验点的激活。同时我们证明了LY2603618对胰腺癌细胞的杀伤作用与CDK激活相关。这些实验结果为LY2603618与DNA损伤类药物的联合使用提供了理论基础。进一步,我们观察了LY2603618与吉西他滨联合用药对胰腺癌细胞的杀伤作用。实验结果表明,LY2603618能增加吉西他滨诱导的细胞死亡和减弱吉西他滨诱导的S期和G2/M期阻滞。同时,我们发现,LY2603618能增强吉西他滨诱导的DNA损伤、抑制吉西他滨细胞周期检验点的激活和下调吉西他滨诱导的核苷酸还原酶(Ribonucleotide reductase,RNR)表达。这些结果说明,LY2603618通过抑制CHK1使细胞DNA损伤修复功能减弱、削弱周期检验点的激活使细胞周期运行和降低RNR活性等方面来增强吉西他滨的抗胰腺癌活性。之后我们还发现LY2603618与吉西他滨联用诱导胰腺癌细胞死亡与CDK激活相关。综上所述,我们的研究结果证明了LY2603618增强吉西他滨的抗胰腺癌作用,说明以CHK1为靶点的药物与DNA损伤类药物联合使用抗胰腺癌是一种有效的治疗策略。本论文的研究为LY2603618的临床应用提供了理论基础,为胰腺癌的治疗提供了新的方向。