论文部分内容阅读
蛋白激酶作为信号通路转导的必要组分参与调控很多生理和病理过程。在病理状态下,某些蛋白激酶过度活化,因此蛋白激酶已经成为治疗许多人类疾病的极具潜力的药物靶点。截至2017年,已经有38个小分子蛋白激酶抑制剂获得美国食品药品监督管理局（Food and Drug Administration,FDA）的批准。NF-κB诱导激酶（NF-κB-inducing kinase,NIK）是非经典NF-κB信号通路的核心组分,具有丰富的生物学功能,如参与淋巴器官形成和B细胞存活与成熟等。除此之外,NIK的过度激活还与许多病理过程相关,例如肝损伤、炎症、纤维化和肝硬化。然而能否通过抑制NIK的活性来治疗肝损伤和炎症还不得而知。在本论文中,我们合成了一个靶向NIK的ATP竞争型小分子抑制剂B022,并对其能否抑制NIK诱导的非经典NF-κB信号通路的激活和NIK诱导的炎性基因的表达以及能否缓解NIK诱导的和外源性毒物四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）诱导的小鼠肝损伤、炎症和氧化应激进行了研究。在Hepa1细胞中,B022能够呈剂量依赖性地抑制NIK诱导的p100蛋白向p52蛋白的加工。同时,B022还能够呈剂量依赖性抑制NIK诱导的NF-κB启动子荧光素酶活性。在Hepa1细胞和从8周龄野生型C57 BL/6雄鼠中分离的小鼠原代肝实质细胞中,B022均能够呈剂量依赖性和时间依赖性地抑制NIK诱导的促炎性细胞因子、趋化因子以及诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）的基因表达。此外,我们还证实了小鼠原代肝实质细胞中过表达NIK能够诱导Raw264.7细胞中IL-1β和iNOS mRNA表达量显著升高,然而B022能够抑制Raw264.7细胞中IL-1β和iNOS的表达。在小鼠的体内实验中,我们发现B022能够抑制NIK诱导的和CCl4诱导的小鼠肝损伤、炎症和氧化应激。在肝脏中特异性过表达NIK的小鼠中,B022能够通过抑制NIK诱导的非经典NF-κB信号通路的激活来抑制NIK诱导的肝脏损伤,此外B022还能够抑制肝脏中特异性过表达NIK诱导的小鼠死亡、肝脏肿大、血清ALT酶活性升高、氧化应激、细胞凋亡、炎症基因的表达以及免疫细胞浸润。更加重要的是,B022还能够抑制CCl4诱导的小鼠急性肝损伤、炎症和氧化应激,具体表现为B022能够抑制CCl4诱导的非经典NF-κB信号通路的激活、血清ALT酶活性升高、氧化应激、细胞凋亡、炎症基因的表达以及免疫细胞浸润。综上所述,无论在体外还是在体内,NIK的抑制剂B022均能够缓解NIK诱导的肝脏炎症,并且B022能够缓解NIK诱导的肝功能衰竭以及抑制NIK诱导的小鼠死亡。此外,B022能够缓解CCl4诱导的肝脏炎症和损伤。我们的工作提示着B022类似物有可能成为一种治疗肝脏炎症、氧化应激和肝损伤的潜在手段。