拟南芥核糖体突变体rpl24b表型的初步研究

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核糖体蛋白作为核糖体组成成分,其主要作用是组装进核糖体亚基,而研究发现一些核糖体蛋白除了核糖体功能外,还具有“外核糖体”功能,例如影响拟南芥叶片极性的建立、胚胎的发育等等。RPL24B蛋白已经被证实与ARF3、ARF5这两个具有u ORFs的基因的翻译再起始有关,且与真核生物起始因子e IF3h协同作用。我们发现RPL24B基因缺失突变体stv1-1在17℃低温条件下会长出pin状结构的茎,本文主要观察了正常生长温度和低温条件下rpl24b突变体的表型,分析除了已经报道的ARF3和ARF5之外,还有哪些基因的表达受RPL24B的调控,并探究了低温条件下突变体pin状表型出现的原因。为了实验的方便,我们首先订购了两个Col-0背景的T-DNA插入突变体,分别命名为rpl24b-1和rpl24b-2,通过RT-PCR的方法发现这两个突变体都是RPL24B表达下调的突变体,其中rpl24b-1下调程度较低,rpl24b-2下调程度较高。之后对这两个突变体在22℃和17℃下的表型进行了观察,发现两个突变体株系的主根根长变短,分枝增加,发育迟缓,叶片卷曲,第一对真叶变尖,花青素含量增加等。此外,rpl24b-2的果荚短小,心皮异常,雌蕊柄变长,并且在17℃下,rpl24b-2会长出pin状结构的茎。这些结果预示着突变体中一些生长素相关基因的表达可能发生了变化。为了证明突变体中生长素的响应有无异常,我们将DR5:GFP/wt分别与两个突变体等位进行杂交,结果表明在突变体根尖中DR5:GFP的表达降低,尤其在rpl24b-2中变化更加显著,说明生长素的浓度在突变体根中降低了。而为了证明突变体中生长素的极性运输途径是否受到干扰,我们分别将PIN1:PIN1-GFP/wt、PIN2:PIN2-GFP/wt、PIN3:PIN3-GFP/wt与两个突变体等位进行了杂交,结果发现突变体中PIN1-GFP、PIN2-GFP和PIN3-GFP的积累水平也下降了,并且rpl24b-2中下降程度更加明显。低温条件下DR5:GFP和PINs-GFP的表达水平比22℃更低。以上实验结果证明突变体中生长素的响应和转运途径都受到干扰,17℃rpl24b-2长出pin状结构茎的原因与PIN1-GFP的低表达有关。
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