香蕉镰刀菌枯萎病拮抗细菌的筛选及其抗菌物质的初步研究

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香蕉镰刀菌枯萎病,又称香蕉黄叶病、巴拿马病,是由尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f.sp. cubense, FOC)引起香蕉枯萎的毁灭性病害,给香蕉种植者带来了相当大的损失,严重制约了香蕉的产业的发展。目前通过栽培管理、抗病育种、化学药剂等虽对控制该病取得了一定效果;但是栽培管理实施难度大,抗病品种农艺性状欠佳,化学防治导致病菌产生抗药性,而且对环境污染严重,迄今为止对该病还没有找到绝对有效的防治方法。因此,筛选FOC拮抗菌株,通过生物防治的方法,开发新型抗菌生物制剂对香蕉镰刀菌枯萎病进行综合防治具有重要的意义。此研究从海南省乐东县发病香蕉园区的土壤中平板稀释法分离到7株对香蕉镰刀菌枯萎病有拮抗效果的菌株。以FOC4作为指示菌对其进行抑菌效果测定,其在PDA平板对峙试验中对FOC4拮抗效果最好的抑菌圈直径达到了21.0mmm。通过复筛得到1株对FOC4强拮抗活性且遗传稳定的菌株。通过对该拮抗菌株进行形态、培养和生理生化特征的研究,加上16S rDNA序列的测定对该菌进行系统发育上的分析,最后鉴定该菌株为多粘芽孢杆菌(Bacillus polymyxa),命名为JB01。探明了碳源、氮源、pH值、接种量等对菌株JB01生长及其产生的抗菌活性物质的影响。通过正交实验对培养基中的碳源和氮源进行了优化。最后确定JB01液体发酵培养基的碳源、氮源组成为:蔗糖1.5%,葡萄糖1.5%,酵母膏0.5%,胰蛋白胨1.5%。当JB01接种量为10%,初始pH值为8.0,200rpm摇床35℃震荡培养48小时后其发酵液抑菌圈最大,优化后对FOC4的抑菌直径达到22.4mm。同时,对菌株JB01发酵液的活性拮抗物质进行了初步研究。经过薄层层析法未得到预期的小分子化合物。通过45%饱和度的硫酸铵对其进行沉淀后,检测到沉淀对FOC4有很强抑制活性,经茚三酮反应阴性,推断可能是环肽。通过乙酸乙酯萃取发酵产物,得到的粗提物经过FOC4孢子抑制试验证明其抑菌活性很强。推断该化合物不止一种,可能有多种拮抗化合物共同作用。将拮抗菌JB01接种到巴西蕉(Musa AAA Cavendish subgroup cv.Brazil)上进行大棚盆栽试验,验证了其对香蕉镰刀菌枯萎病的防效。在108天时,对照全部死亡,JB01处理过的香蕉抗病效率达70.7%,证明该菌对香蕉镰刀菌枯萎病有很强的防治效果。
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