论文部分内容阅读
目的：研究14-3-36基因在鼻咽癌细胞株HNE1和耐顺铂的鼻咽癌细胞株HNE1-DDP中的表达及其启动子区域的甲基化情况,初步探讨14-3-3σ基因与耐药的关系。方法：首先采用蛋白印迹法(Western Blotting)检测H(?)NE1-DDP细胞与HNE1细胞14-3-36的表达,并采用荧光定量PCR(Quantitative PCR,qPCR)检测14-3-36基因的mRNA表达水平。然后利用甲基化抑制剂5-杂氮-2’-脱氧胞苷处理HNE1-DDP细胞,观察不同浓度对细胞生长及细胞周期的影响,并采用Western Blotting及qPCR分别检测药物干预前后14-3-36基因表达的改变。用Western Blotting检测p53蛋白在HNE1及HNE1-DDP中的表达,并采用亚硫酸氢钠处理后测序法(Bisulfite genomic sequencing PCR)检测14-3-36启动子区域CpG位点的甲基化情况。采用SPSS13.0统计软件进行数据分析。结果：较HNE1细胞,14-3-3σ蛋白及其mRNA、p53蛋白在HNE1-DDP细胞株中表达均明显下降。经过不同浓度的5-aza-2’-dC(0,1,5,10μmol/L)处理HNE1-DDP细胞后,细胞生长曲线出现明显差异,细胞活性抑制,细胞阻滞在S期和G2-M期。同时,随着药物的处理,HNE1-DDP细胞的14-3-36蛋白和mRNA重新表达并逐渐上升。此外,亲本细胞株HNE1、耐药细胞株HNE1-DDP及处理后的细胞株中,14-3-3σ启动子区域的CpG位点几乎均为非甲基化状态。结论：14-3-36下调与鼻咽癌耐药相关,提示14-3-36可能是鼻咽癌耐药相关的蛋白。5-aza-2′-dC具有抑制鼻咽癌耐药细胞株生长、阻滞耐药细胞株周期和上调14-3-36的作用,且14-3-36可能也参与了药物的抑制作用。但在鼻咽癌耐药细胞株HNE1-DDP中14-3-36表达下调可能不是由于其甲基化所致,而和抑瘤蛋白p53的表达下降有关,但具体机制有待进一步研究。