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微生物三次采油(Microbial Enhanced Oil Recovery, MEOR)技术是通过微生物代谢产物的作用来提高原油采收率的一项综合性技术。其中,生物表面活性剂以其卓越的驱油效率、低毒、无污染、可生物降解、廉价等特点,展现了良好的应用前景,引起了人们的广泛关注。因此,筛选高效生物表面活性剂产生菌、并对其发酵条件进行优化、以提高生物表面活性剂的产量,对于微生物三次采油的应用研究具有重要意义。本论文从生物表面活性剂产生菌的筛选、菌种鉴定、发酵条件优化几方面进行了研究,主要研究结果如下：1.采用血平板初筛、排油圈复筛的方法,筛选出一株产生物表面活性剂性能最强的采油菌DN4-3,经薄层层析(TLC)分析确定该菌株所产表面活性剂为脂肽类生物表面活性剂。2.对筛选得到的DN4-3菌株进行系统鉴定,通过形态学观察、生理生化实验和16S rDNA序列分析,表明该菌株与枯草芽孢杆菌有98%以上的相似性,鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌DN4-3。3.在单因素影响实验的基础上,采用Plackett-Burman设计和响应面分析法相结合的方法,对该菌株的摇瓶发酵工艺进行优化,确定最佳发酵培养基配方和培养条件为：葡萄糖27.83g/L、酵母浸粉2.73g/L、NaCl 2.37g/L、KH2PO49/L、K2HPO43g/L、CaCl2 0.16g/L、MgSO4·7H2O 0.5g/L、接种量为4%、种龄16h、装液量250mL/500mL、温度37℃、初始pH7.0、摇床转速160r／min、发酵72h,脂肽产量达到最大值1025.98mg/L,比优化前菌株合成脂肽的产量提高了35.43%。