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本研究从溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)HY9901中成功克隆获得Ⅲ型分泌系统(T3SS)va1686基因的编码区序列(GenBank:KX245316),该基因全长1164 bp,可编码387个氨基酸,应用生物信息学的方法对溶藻弧菌HY9901Ⅲ型分泌系统效应蛋白Va1686的理化性质、蛋白结构、遗传进化关系和抗原特性等方面进行预测和分析。结果表明:Va1686蛋白为稳定的亲水性蛋白,蛋白呈酸性,不具有跨膜区和信号肽,二级结构以α螺旋为主。进化分析显示溶藻弧菌HY9901与哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)聚为一支。Va1686蛋白包含一段与细胞分裂相关的Fic superfamily保守结构域。抗原特性分析表明Va1686可能的B细胞抗原优势表位,分别是第48～49、82～85、125～126、150～153、185～186、236～237等区段。利用SWISS-MODEL软件,模拟了 Va1686三维结构模型,发现与其同源蛋白副溶血弧菌vopS非常相似,相似度达到89.46%,提示Va1686可作为弧菌共同抗原。同时利用Overlap PCR和两次同源重组的技术,采用β2163和自杀质粒p LP12高效接合体系在溶藻弧菌上敲除了 T3SS的效应蛋白基因va1686,结合正、反向筛选方法,得到了无抗生素标记的溶藻弧菌HY9901 va1686基因无痕缺失突变株和回补株,并对其进行了生物学表型分析,△va1686突变株和回补株在遗传稳定性、生长、生物膜形成、泳动能力和ECPase活性方面与野生株HY9901差异不显著,对石斑鱼的半数致死实验发现效应蛋白Va1686的缺失使溶藻弧菌HY9901的毒力下降了约两个数量级。本研究利用溶藻弧菌HY9901菌株研究发现被溶藻弧菌HY9901菌株感染后的草鱼肾细胞(CIK)在LSM710激光扫描共聚焦显微镜下不同的时间点呈现出不同的结构状态,野生株及互补株与阳性对照变化相似,随着时间的延长细胞骨架逐渐坍塌,直至消失。CIK细胞中的Caspase3酶被T3SS激活,而缺失株Caspase3酶活性则变化不明显,证实溶藻弧菌效应蛋白Va1686感染鱼类细胞可诱发细胞凋亡。HY9901菌株的感染也导致鱼细胞中乳酸脱氢酶的释放。总之,这些数据证实,溶藻弧菌可通过效应蛋白Va1686导致鱼细胞的凋亡。这项研究对弧菌类致病菌引起宿主细胞死亡的机制提供了重要的理论依据。