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第一部分pAdEasyBMP9和pAdEasyGFP的扩增，C3H10T1/2细胞的诱导目的：利用HEK293细胞扩增收集高滴度pAdEasyBMP9和pAdEasyGFP，以此诱导C3H10T1/2细胞使之呈BMP9高表达。方法：利用HEK293细胞，反复扩增后收集得到高滴度pAdEasyGFP和pAdEasyBMP9。当C3H10T1/2细胞生长融合至60%左右时，加入AdEasyGFP和AdEasyBMP9诱导细胞，8小时后换液，倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白，流式细胞术测诱导效率。结果：反复扩增后得到高滴度AdEasyGFP和AdEasyBMP9。AdEasyBMP9诱导C3H10T1/2细胞24小时和21天诱导率效率分别为59.99%和42.16%。结论：反复扩增HEK293细胞可得到高滴度AdEasyGFP和AdEasyBMP9，AdEasyGFP和AdEasyBMP9诱导C3H10T1/2细胞后可使其高表达GFP和BMP9。第二部分ERK1/2和P38MAPK通路在BMP9诱导C3H10T1/2细胞分化过程中的激活目的：研究ERK1/2和P38MAPK通路在BMP9诱导C3H10T1/2细胞分化过程中的激活。方法：免疫印迹检测经pAdEasyBMP9诱导24小时的C3H10T1/2细胞phospho-ERK1/2和ERK1/2、phospho-P38MAPK和P38MAPK的表达，免疫荧光定位phospho-ERK1/2、phospho-P38MAPK。结果：1.pAdEasyBMP9促进phospho-ERK1/2、phospho-P38MAPK的表达增高，却不影响ERK1/2、P38MAPK的表达水平；2.经pAdEasyBMP9诱导前的C3H10T1/2细胞和经pAdEasyGFP诱导的C3H10T1/2细胞，phospho-ERK1/2和phospho-P38MAPK弥散分布于整个细胞内；pAdEasyBMP9诱导C3H10T1/2细胞24小时，phospho-ERK1/2有从胞浆到胞核移动、表达于胞核的不同状态；phospho-P38MAPK有表达于胞浆和胞核、仅表达于胞核的不同状态。结论：pAdEasyBMP9诱导C3H10T1/2细胞分化过程中能够激活ERK1/2和P38MAPK通路。第三部分ERK1/2和P38MAPK通路在BMP9诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化过程中的作用目的：研究ERK1/2和P38MAPK通路在BMP9诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化过程中的作用。方法：U0126和SB203580分别阻断C3H10T1/2细胞ERK1/2和P38MAPK通路，pAdEasyBMP9诱导21天时免疫印迹检测心肌特异性蛋白CX43，cTnT的表达，免疫荧光检测心肌特异性蛋白cTnT、-MHC的表达，Q-RT-PCR检测心肌特异性基因GATA4,MEF2C的表达。结果：U0126和SB203580可显著性地抑制由pAdEasyBMP9诱导的C3H10T1/2细胞CX43、cTnT、-MHC、GATA4、MEF2C的表达。结论：pAdEasyBMP9能通过ERK1/2和P38MAPK通路诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化。