论文部分内容阅读
目的研究miR-144靶向ROCK1与肝癌侵袭转移的关系,探讨生物信息学方法用于预测靶miRNA可行性。方法选取经病理证实的42例肝癌标本,28例癌旁正常肝组织标本,通过免疫组化检测ROCK1蛋白的表达；生物信息学方法预测ROCK1的靶miRNAs并分析与其结合最稳定、特异性最好的靶miRNA; qRT-PCR技术检测miR-144与ROCK1的结合情况,分析miR-144与肝癌细胞转移关系；Western blot检测miR-144靶向ROCK1抑制其表达,Transwell实验分析miR-144下调ROCK1表达后,肝癌细胞侵袭转移能力改变。结果(1)生物信息学方法获得了17个ROCK1的靶miRNAs,其中与ROCK1结合最稳定、特异性最好的是miR-144。(2) ROCK1在肝癌中表达阳性率为76.2%(32/42),癌旁正常肝组织中表达阳性率为28.6%(8/28),两者有显著性差异(P<0.05)。(3)低转移人肝癌细胞株中ROCK1低表达,而miR-144高表达；高转移人肝癌细胞株中ROCK1高表达,而miR-144低表达,说明miR-144可抑制ROCK1表达,与肝癌转移有关(P<0.053)。(4) HepG2-miR-144mimics细胞株中miR-144表达增高,而ROCK1表达下调；而HepG2、HepG2-miR-Scramble、HepG2-miR-144-PM三个细胞株中miR-144表达水平和ROCK1表达水平没有明显变化。说明,miR-144能和ROCK1mRNA结合下调其表达水平。(5) HepG2-miR-144mimics侵袭细胞计数明显低于其他三组(P<0.05),HepG2、HepG2-miR-Scramble、HepG2-miR-144-PM三组之间侵袭细胞计数无显著性差异(P>0.05)。说明增加miR-144表达能抑制ROCK1表达,从而抑制肝癌细胞侵袭转移。结论(1)与ROCK1结合的靶miRNAs有多个,其中结合最稳定、特异性最好的是miRNA-144。(2)miR-144与ROCK1的3’UTR端结合,降解ROCK1表达,抑制肝癌的侵袭转移。