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B淋巴细胞诱导成熟蛋白1（Blimp-1）是脊椎动物中参与B细胞分化的重要的转录因子,B淋巴细胞分化的不同阶段受到不同的转录因子的调控。其中在B细胞分化过程中,Blimp-1表达于浆细胞、幼B细胞中以及生发中心部分B细胞中。Blimp-1参与调节多种类型组织的发育,调控细胞分化过程。此外,在正常浆细胞发生恶性转化时也可检测到较高水平的Blimp-1的β同种型的表达。Blimp-1属于PR基因家族成员,该家族以数量不等的Zn F-C2H2结构域为特征。该基因的DNA结合结构域在脊椎动物中高度保守,斑马鱼、非洲爪蟾、东方红鳍鲀和小鼠之间的同源性超过93%。blimp-1在鱼类中的研究较少,本研究通过分析不同物种中blimp-1序列保守区设计引物克隆鲤鱼blimp-1基因序列,分析其序列特征并构建进化树。实验构建了嗜水气单胞菌浸泡和注射两种方式进行免疫刺激的鲤鱼模型,同时取材了从受精后第一天到孵化期21天共8个不同发育时期的组织材料,通过Real-time PCR检测上述组织中blimp-1基因在mRNA水平的表达变化。此外,构建了鲤鱼blimp-1原核表达载体,诱导表达部分片段,纯化蛋白,制备多克隆抗体,并对不同发育时期中的Blimp-1蛋白的表达进行了检测。鲤鱼blimp-1的cDNA为2765 bp,其中ORF区2334 bp,编码778个氨基酸。结构分析表明,该基因具有SET结构域和五个Zn F-C2H2结构域。Real-time PCR检测结果表明,blimp-1在各检测组织中均有表达,其中,在肠道中表达量最高,其次是脾脏、头肾和肝脏。Real-time PCR检测经过嗜水气单胞菌浸泡和注射免疫刺激后的组织,blimp-1在肠道中的表达量最高。其中,在注射组脾脏组织中出现了表达下调,而浸泡刺激组较为明显的表达上调出现于中肠组织。在发育时期的鱼体中,检测结果表明,在受精后第一天的受精卵中可以检测到blimp-1的表达,而在之后取材的八个不同发育时期表达量均较低。上述实验结果初步显示,blimp-1在各免疫相关组织中表达,提示其在上述组织的B细胞应答过程中发挥作用。两种刺激方式下,不同组织应答表达变化说明系统免疫中的B细胞应答与粘膜相关淋巴组织中的B细胞的应答都可能有blimp-1的参与,并且应答规律不同。Western blotting检测发育时期Blimp-1的表达显示:受精卵时期Blimp-1的表达较少,在发眼卵时期表达最高。与blimp-1在mRNA水平表达量相反,blimp-1 mRNA在受精卵时期表达量最高,在发眼卵时期表达量下降。鱼类是最早产生特异性免疫的脊椎动物,对其B细胞及其分泌抗体功能的研究将有助于更深入的认识特异性免疫的进化和机制。blimp-1作为转录因子在胚胎发育和B细胞分化过程中都具有重要的作用,本实验对其基因克隆及表达定量的研究以及多克隆抗体的制备为进一步在组织水平和细胞水平的表达定位及功能研究提供了基础。