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目的microRNA(miRNA或miR)-429在某些肿瘤中低表达,扮演抑癌基因的角色,但在另一些肿瘤中高表达,起类似癌基因的作用。目前有关miR-429在乳腺癌中表达情况的研究较少。有研究结果显示miR-429在乳腺癌组织中的表达较癌旁组织中的表达明显减低。秦等利用探针法实时荧光定量PCR检测人乳腺癌细胞系中miR-429的表达情况,结果显示:miR-429在不同人乳腺癌细胞系中的表达存在差异。其在BT20和T47D细胞系中表达量最高,BT474、SK-BR-3、MCF-7和MDA-MB-231细胞系中表达量相当,而在Bcap37细胞中表达量最低。Li等发现miR-429在MDA-MB-231和HCC1937等三阴性乳腺癌(TNBC)细胞中低表达。关于miR-429在乳腺癌中的靶基因及其生物学功能的研究较少,且存在一定的争议。秦等的研究发现miR-429能显著促进Bcap37细胞的增殖和迁移。Li等的研究发现,miR-429-5p通过下调靶基因LIMK1mRNA和蛋白表达,显著抑制三阴性乳腺癌(TNBC)细胞的增殖,迁移和侵袭。Ye等的研究认为miR-429可通过调控ZEB1和CRKL蛋白下调,进而抑制乳腺癌细胞侵袭迁移。miRNA主要通过与靶基因的mRNA3’非翻译区(UTR)完全或不完全互补结合而发挥其生物学功能。因此探讨miRNA在肿瘤中的作用机制,关键是研究miRNA及其靶基因的相互作用。miR-429及其靶基因在乳腺癌领域中的功能及作用机制是目前研究的热点。本实验旨在通过生物信息学方法预测miR-429可能的靶基因,根据靶基因的GO分析,概括靶基因主要发挥的生物学功能。探讨miR-429在人乳腺癌细胞系中的表达和生物学功能,初步鉴定miR-429的靶基因。方法①体外培养人乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞和人乳腺上皮MCF-10A细胞,采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测各细胞系中miR-429的相对表达量。从中筛选出miR-429表达量最低的细胞系。②CY3标记的mimics NC和TransIntroTM EL Transfection Reagent转染试剂分别转染MDA-MB-231、MCF-7细胞,并分别于转染后24h、36h、48h、60h、72h观察荧光强度,采用转染效率最高的转染条件进行后续转染实验。③实验分为以下 5 组:miR-429 mimics、mimics NC、control、inmhibitors NC、miR-429 inhibitors。通过MTT实验和划痕实验确定miR-429对各组人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和迁移的影响。④以(has-)miR-429为检索词,分别在Targetscan、miRanda两个数据库中对miR-429的靶基因进行预测,筛选出两个软件都能预测到的基因作为其可能的靶基因。将预测得到的miR-429靶基因用Cytoscape 3.6.0软件进行GO功能注释和富集分析。选择miR-429待测靶基因中富集了参与调控癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭等生物学行为的靶基因。通过GCBI多基因雷达筛选出与乳腺癌有关的靶基因。通过miRTarBase、miRNA CancerMap数据库和文献分析排除已验证过的miR-429的靶基因。⑤qPCR和蛋白质印迹检测过表达和抑制miR-429,对待测靶基因转录和翻译水平的影响,初步鉴定miR-429的靶基因。结果miR-429在人乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞系中低表达。上调miR-429表达后,MDA-MB-231细胞增殖能力被显著抑制(F=33.1060,P<0.05),迁移能力明显减弱(F=57.5900,P<0.05)。过表达 miR-429 后,LRP1(F=27.8400,P=0.0009)、MYCN(F=25.9000,P=0.0002)、PLK2(F=21.8900,P=0.0018)等基因的表达显著增高,而 TIMP2、CREB1、DUSP1、MED13、GABPA、GDI2、UBE2B、EPS8、TUBB(P值均>0.05)等基因的表达无显著差异。然而,过表达miR-429后,CREB1(F=2.5570,P>0.05)和DUSP1(F=0.8425,P>0.05)蛋白表达水平无明显统计学差异;TIMP2蛋白的相对表达量降低(F=33.7400,P<0.05);LRP1蛋白的相对表达量降低(F=6.2590,P<0.05)。结论在MDA-MB-231细胞中,过表达miR-429抑制细胞增殖和迁移。miR-429的过表达可能通过转录后翻译抑制TIMP2和LRP1蛋白在MDA-MB-231细胞中的表达。初步鉴定flMP2和LRP1是miR-429的靶基因,CREB1和DUSP1不是miR-429的靶基因。