根据世界卫生组织2021年的数据,癌症是仅次于心血管疾病的全球第二大致死疾病。因此,开发新型的抗癌症疗法显得尤为必要。外周血单核细胞PBMC（Peripheral blood mononuclear cell）中60～70%为T淋巴细胞,是重要的抗肿瘤效应细胞。Bi TE（Bispecific T cell engager）因其可同时识别CD3和TAA（Tumor associated antigens）而精准高效的诱导T细胞活化并杀伤肿瘤细胞。然而,在Bi TE诱导T细胞活化过程中,因缺少T细胞共刺激信号的参与,T细胞的活化并不充分,容易产生活化诱导的细胞凋亡现象AICD（Activation induced cell death）。在本研究中,我们将CD3ε胞外区,CD28跨膜与胞内共刺激信号结构域和CD3ζ胞内结构域串联,设计构建了新的融合基因,命名为:CD3εζ28。利用表达绿色荧光蛋白GFP（Green fluorescent protein）逆转录病毒载体将CD3εζ28基因植入T细胞,构建一种新型的工程化T细胞,命名为:T-CD3εζ28-GFP。在此基础上,我们进一步构建了可以分泌识别CD19及CD3的Bi TE并且表达CD3εζ28的T细胞T-CD3εζ28-Bi TE.19。这两种工程化T细胞都可利用CD28作为共刺激信号,促进Bi TE诱导的T细胞活化。利用所构建的两种新型T细胞分别进行体内外功能实验验证,发现:1)T-CD3εζ28-GFP细胞活化更完全。与未转导T细胞（n ATC）和转导对照质粒T细胞（T-GFP）相比,T-CD3εζ28-GFP细胞增殖更快。将效应T细胞与肿瘤细胞共培养发现,Bi TE可介导T-CD3εζ28-GFP细胞对肿瘤细胞产生更强的杀伤效果。利用ELISA检测共培养细胞上清中细胞因子的浓度,发现T-CD3εζ28-GFP细胞比对照T细胞可分泌更高水平的IL-2和IFN-γ。通过将T细胞与肿瘤细胞进行多轮共培养连续杀伤实验,结果发现,T-CD3εζ28-GFP相比于对照组,具有更好的存活和杀伤持续性。2)T-CD3εζ28-GFP具有更好的抑瘤能力及瘤内存活能力。为了证明T-CD3εζ28-GFP的体内抗肿瘤效果,我们构建了表达靶向EGFRv III的Bi TE的He La稳定细胞株。利用该细胞构建裸鼠皮下肿瘤移植模型,通过瘤内注射T细胞检测T细胞在体内的有效性。结果显示,T-CD3εζ28-GFP在体内具有更好的抑瘤能力。利用免疫组织化学分析以及流式细胞分析T细胞在肿瘤内的存活情况,结果显示,T-CD3εζ28-GFP具有更高的瘤内存活能力。3)T-CD3εζ28-Bi TE.19进一步加强T细胞的抗肿瘤能力及持续性。为了验证同时分泌Bi TE和表达CD3εζ28的T-CD3εζ28-Bi TE.19的肿瘤杀伤效果,进行体外功能实验研究。效应细胞与靶细胞共培养杀伤实验发现,T-CD3εζ28-Bi TE.19相比于对照组在体外具有更强的肿瘤细胞杀伤能力。收集T细胞与肿瘤细胞共培养24 h的细胞培养上清,利用ELISA检测细胞因子的浓度,结果发现T-CD3εζ28-Bi TE.19细胞具有更高的细胞因子分泌水平,证明T-CD3εζ28-Bi TE.19相比对照组具有更高的活化水平。通过将T细胞与肿瘤细胞进行多轮共培养连续杀伤实验,结果发现,T-CD3εζ28-Bi TE.19相比于对照组,具有更好的持续性。利用流式细胞分析每一轮共培养后T细胞的凋亡情况,结果发现每一轮杀伤实验之后,T-CD3εζ28-Bi TE.19均具有更低的凋亡水平。4)T-CD3εζ28-Bi TE.19显示出更强的体内抑瘤能力。为了证明T-CD3εζ28-Bi TE.19在体内的抗肿瘤效果,我们构建了表达靶向CD19的Bi TE的He La稳定细胞株,利用该细胞构建裸鼠皮下肿瘤模型,通过瘤内注射T细胞检测T细胞在体内的有效性,结果显示,T-CD3εζ28-BiTE.19在体内具有更好的抑瘤能力。