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苦豆子是豆科槐属植物苦豆子的干燥全草、根及种子，其本身具有清热解毒，杀虫止痒等功效。近几年科学研究证实因其具有很好的抗癌、抗氧化、抗心律失常、增强机体免疫等药理作用[1]而越来越受到医药界人士的关注。苦豆子多糖作为从苦豆子药材中提取的一类特殊的生物高分子物质很少被广泛的应用和报道。本课题组经初步实验研究显示苦豆子多糖具有一定的抗肿瘤效果。为了证实苦豆子多糖是如何发挥抗肿瘤作用，并进一步开发其他药理活性，本论文将从苦豆子多糖的提取分离纯化为基础，进一步探究其分子结构，并通过一系列的结构修饰研究其体外抗氧化活性，为今后苦豆子多糖的进一步研究及临床应用提供合理的理论依据。本课题主要从苦豆子多糖的分离提纯、组分分析、化学结构修饰以及苦豆子多糖及其衍生物的体外抗氧化活性这几个方面进行研究。 第一部分苦豆子多糖的分离纯化和组分分析 苦豆子药材经过水提醇沉法得到粗多糖，再依次经过Sevage法脱蛋白，20万截留分子量的中空纤维膜微滤，DEAE-Sephadex A-25阴离子交换柱层析和凝胶 G-200柱层析进行分级纯化。通过以上分离纯化步骤，最终得到四种相对分子质量分布均一的纯多糖，分别命名为 SAP-S I，SAP-S II，SAP-S III和SAP-S IV，其中最大组分SAP-S I经G-200柱层析检测其为均一多糖(SAP)，多糖含量高达98.85％。TFA完全水解后的多糖通过高效薄层色谱法测得单糖组成，得到四种单糖成分，分别为甘露糖、半乳糖、葡萄糖和鼠李糖；利用PMP柱前衍生化HPLC法最终得到四种单糖摩尔比为：D-甘露糖、D-半乳糖、D-葡萄糖、D-鼠李糖=370:190:10:1； 第二部分苦豆子多糖的理化性质和分子量的测定 采用苯酚-硫酸法测定各糖组分中总糖、蛋白质和葡萄糖醛酸含量,绘制各组分标准曲线，根据回归方程计算出各组分含量。其中SAP总糖含量为98.85%，SAP-SII总糖含量为95.58%。采用高效凝胶色谱法对苦豆子多糖的分子量进行测定，最终得出苦豆子多糖(SAP)分子量为9.6×105左右； 第三部分苦豆子多糖的化学结构修饰 以苦豆子多糖为原料，采用氢氧化钠—氯乙酸钠反应体系，对苦豆子多糖进行羧甲基化修饰。以羧甲基取代度为指标，通过L9(34)正交试验确定了其最优反应条件：原料苦豆子多糖50mg，在氯乙酸钠0.5g，反应温度55℃，反应时间5h，氢氧化钠浓度25%的优化条件下，羧甲基苦豆子多糖取代度DS可达1.50以上。且红外光谱分析表明，该方法已成功引入了羧甲基基团；以苦豆子多糖为原料，甲酰胺为溶剂，乙酸酐为乙酰化试剂对苦豆子多糖进行乙酰化修饰，得到修饰后的乙酰化苦豆子多糖，通过红外光谱特征分析表明，该方法很好的实现了苦豆子多糖的乙酰化修饰。 第四部分苦豆子多糖及其衍生物的抗氧化活性研究 通过体外抗氧化实验和还原性实验，以VC为阳性对照，研究苦豆子多糖、羧甲基化苦豆子多糖和乙酰化苦豆子多糖的抗氧化活性和还原能力。结果表明，在一定浓度范围内，三种多糖对1,1-二苯基-2-苦苯肼自由基(DPPH·)、羟基自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O2-·)都有很好的清除作用，还原能力也有所提高，且清除率随着多糖浓度增加而逐渐增大。其中，四者清除1,1-二苯基-2-苦苯肼自由基(DPPH·)和羟基自由基(·OH)的能力大小均为 VC>羧甲基化苦豆子多糖>乙酰化苦豆子多糖>苦豆子多糖；清除超氧阴离子自由基(O2-·)的能力大小依次为 VC>乙酰化苦豆子多糖>羧甲基化苦豆子多糖>苦豆子多糖；还原能力大小依次为VC>乙酰化苦豆子多糖>羧甲基化苦豆子多糖>苦豆子多糖。实验证实，经过结构修饰后得到的的苦豆子多糖衍生物其抗氧化活性和还原能力都有明显的提高，该结论为以后苦豆子多糖在其他生物活性方面的进一步开发利用提供了理论依据。