猪圆环病毒PCR-RFLP分型方法的建立及其国内流行毒株的遗传变异分析

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猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus Type 2, PCV2)是近些年来对养猪业危害最严重的病毒之一,主要包括断奶猪多系统衰竭综合征(Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome, PMWS)、断奶猪和育肥猪的呼吸道疾病(Porcine Respiratory Disease complex, PRDS)、猪皮炎和肾炎综合征(Porcine Dernmatis and Nephropathy Syndrome, PDNS)、幼龄仔猪A2型先天性震颤(Congenital Tremors, CT)、间质性肺炎(Interstitial Pneumonitis, IP)、增生性坏死性肺炎(Proliferation Necrotizing Pneumonia, PNP)等。PCV2的感染能降低猪体免疫力,常引起其他病原微生物的继发并发感染,加重病情。自1982年命名以来,发展迅速,在世界许多国家和地区广泛流行,给世界养猪业造成巨大的经济损失,严重影响着世界养猪业的发展。我国很多地区也陆续报道有PCV2流行,黑龙江省有PCV2感染的疑似病例,黑龙江省兽医卫生防疫站的张加勇等已经对黑龙江省内的6个地(市)十个种猪场进行了PCV2血清学调查,但尚无病原学诊断的证据,为了为PCV2的实验室诊断提供一种可靠的病原学检测方法,本研究旨在建立一种快速、方便的PCV的PCR-RFLP分型方法适用于现地检测。通过对GenBank中公布的8株PCV2和8株PCV1基因组全序列的比较分析,设计一对PCV2特异引物,含有特异性酶切位点EcoR I和一对PCV1特异引物,含有特异性酶切位点Hinc II;两对引物均含ORF2。建立了一种快速检测PCV1和PCV2的敏感、特异、重复性好的PCR-RFLP鉴别诊断方法,应用本方法对对国内部分地区的PCV2分离株的ORF2遗传变异情况进行了分析,9株PCV2的ORF2基因核酸序列同源性比较,同源性大于97%,在进化树上与国内的分离株处于同一分支上,关系最近;PCV2的ORF2呈现一定的地域性和相对的稳定性。在发病猪病料中检测到2株PCV1,实验室保存的PK-15细胞检测到1株PCV1,并进行了全基因组的测序:J5-PCV1 1758bp;G1-PCV1 1759bp;Wen-PCV1 1759bp。
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