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第一部分P53、USP7、TSPYL5基因多态性与乳腺癌易感性关系的研究目的：P53通路在DNA损伤修复、细胞凋亡、周期调控等方面发挥着重要的抑癌作用,此通路中某些基因的多态性与肿瘤易感性及肿瘤患者临床病理参数有关。研究显示,泛素特异蛋白酶7(USP7)和类Y染色体编码睾丸特异蛋白5(TSPYL5)可调节P53的活性。此研究旨在探讨P53、USP7和TSPYL5基因的单核苷酸多态性(SNP)与中国汉族女性乳腺癌易感性的关系。方法：本阶段研究期间,共有192名乳腺癌患者和与之年龄匹配的192名对照女性入组,留取其外周血液样本,并提取DNA。以Hapmap数据库及Haploview软件选取P53、USP7、TSPYL5基因的标签单核苷酸多态性位点,并使用基质辅助激光解析电离时间飞行质谱方法进行各个多态性位点的分型检测。结果：本部分研究中,乳腺癌患者和对照组女性之间年龄、绝经状态未见差异,P值分别为0.926,0.610。对照组中,各个SNP位点的基因型频率经检验均符合Hardy-Weinberg平衡,P值介于0.082至0.915之间。统计分析结果显示,患者组和对照组女性的USP7基因上的rs12924995位点和rs2304467位点的突变频率存在统计学差异,P值分别为0.026,0.037;而P53基因和TSPLY5基因的各个多态性位点,以及USP7基因上其它位点的基因型分布在两组之间却均未见显著差异。结论：本部分研究成功检测了3个基因序列上的20余个单核苷酸多态性位点,从中筛选出位于USP7基因上的rs12924995和rs2304467两个可能与中国汉族女性乳腺癌易感性相关的位点。此部分研究结果为下一步大样本病例对照研究提供了数据支持。第二部分USP7基因rs2304467、 rsl2924995多态性与乳腺癌易感性关系的研究目的：以第一部分的研究结果为基础,在大样本的人群中进行病例对照研究以验证USP7基因rs2304467和rs12924995两个单核苷酸多态性位点与中国汉族女性乳腺癌易感性的关系。方法：选取乳腺癌患者及与之年龄匹配的对照女性入组,收集其外周静脉血液标本并提取DNA。使用聚合酶链式反应-限制性片段多态性方法(PCR-RFLP)检测各样本rs2304467和rs12924995两个位点的基因型。查阅患者病历,收集乳腺癌患者初潮年龄、孕产史、病理类型、TNM分期、雌孕激素受体状态等相关临床资料。结果：本研究第一、第二部分进行期间,共有975名乳腺癌患者以及910名与之年龄匹配的对照女性入组。正常组中,两位点基因型的分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P值分别为0.979,0.111)。多因素分析显示：杂合子rs2304467CG基因型携带者患病风险与rs2304467CC基因型携带者相比未见明显差异(P=0.679,OR=0.95,95%CI：0.74-1.21),而纯合子rs2304467GG基因型携带者的发病风险却比CC基因型者显著降低(P<0.001,OR=0.51,95%CI:0.36-0.73)。与rs2304467GG基因型者相比,rs2304467C等位基因携带者(CC和CG基因型)发病风险更高(P<0.001,OR=1.87,95%Cl1.44-2.44)。对于多态性位点rs12924995基因型的分析显示,CC、 AC基因型携带者分别与AA基因型者相比较时,发病风险均未见统计学差异(P值分别为0.074,0.992);而将rs12924995A等位基因携带者(即AA和AC基因型)与rs12924995CC基因型者相比则发现,前者患乳腺癌风险更高(P=0.002,OR=1.36,95%Cl:1.12-1.65)。结论：在中国汉族人群中,USP7基因rs2304467多态性位点基因型为CC、 CG的女性和rs12924995位点为AA AC基因型的女性患乳腺癌的风险相对更高。第三部分外周血线粒体DNA含量及线粒体DNA10398位点多态性与乳腺癌易感性关系的研究目的：国内外研究显示,P53在线粒体DNA损伤修复、线粒体功能调节方面同样发挥着重要作用。线粒体DNA比核内DNA更易受到损伤,线粒体DNA含量的变化和序列的多态性与多种肿瘤的发生、发展有关。但是,外周血中线粒体DNA含量及某些多态性位点是否与乳腺癌易感性有关目前尚不清楚。此部分旨在研究中国汉族女性外周血线粒体DNA含量和10398位点多态性是否可以作为乳腺癌易感性评估的分子标记。方法：本研究期间,共检测了506名乳腺癌患者以及与之年龄匹配的520名对照女性的DNA样本。线粒体DNA含量采用实时定量PCR方法(Real-time PCR)检测,线粒体DNA10398位点基因型的检测采用聚合酶链式反应-限制性片段多态性方法。结果：外周血线粒体DNA含量和A10398G位点基因型在乳腺癌患者和对照组女性之间并无统计学差异。但进一步的分析显示,在绝经前女性中,线粒体DNA含量异常降低与乳腺癌易感性相关(P=0.001,线粒体DNA含量高者：OR=0.54,95%CI:0.38-0.77),而在绝经后的女性人群中,异常增高的线粒体DNA含量与乳腺癌易感性相关(P=0.027,线粒体DNA含量高者OR=1.49,95%CI:1.05-2.11)。另外,线粒体DNA含量还与乳腺癌患者的年龄、绝经与否、孕产次数等有关(P值分别为<0.001,0.006,0.001,<0.001)。然而,不同年龄、绝经状态和线粒体DNA含量亚组内,A10398G位点的基因型分布在病例和对照组间也均无差异(P值从0.396至0.906)。病理类型不同、人表皮生长因子受体2(Her2)表达水平不同的乳腺癌患者间10398A和10398G基因型分布存在差异(P=0.006,0.016),而其他不同临床病理参数的亚组中却未见显著性差异(P值大小从0.052至0.977)。与USP7基因2个SNP位点联合分析显示,rs2304467和rs12924995两位点基因型不会影响mtDNA含量(P值介于0.076至0.863),但两位点与mtDNA含量交叉分组可进一步区别各亚组女性的乳腺癌患病风险差异(OR值最高为3.46,95%CI：1.61-7.39)。结论：此部分病例对照研究表明,在中国汉族人群中,外周血线粒体DNA含量异常降低的绝经前女性和线粒体DNA含量异常升高的绝经后女性是乳腺癌发病的高危人群。线粒体DNA含量可与USP7基因2个单核苷酸多态性位点共同作为乳腺癌易感性评估的分子标记。