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目的:血小板衍生生长因子受体(PDGFR)属于受体酪氨酸激酶。PDGFR的过表达、突变激活、融合表达等异常在某些肿瘤的发生、发展、转移中发挥重要作用。在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞中通常伴有PDGFR的过表达和突变激活。在NSCLC中,PDGF/PDGFR的过表达常与癌症的不良预后有关。本实验旨在研究PDGFRβ抑制剂CP-673451对NSCLC细胞的细胞毒性作用及其潜在的机制,并进一步探究CP-673451联合顺铂对NSCLC的细胞毒性作用,以期为临床应用PDGFR靶向治疗NSCLC提供实验依据。方法:(1)通过免疫荧光染色检测PDGFRβ在A549和H358细胞中的表达情况;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测CP-673451对A549和H358细胞中磷酸化PDGFRβ水平的影响;MTT法检测CP-673451对A549、H358和BEAS-2B细胞的增殖能力的影响;(2)通过流式细胞术、Caspase-Glo 3/7活性测定,检测CP-673451对A549和BEAS-2B细胞凋亡的影响;(3)通过DCFH-DA活性氧检测试剂盒测定CP-673451对A549细胞内ROS含量的影响,之后通过流式细胞术及Caspase-Glo 3/7测定在外加抗氧化剂NAC后,CP-673451对A549细胞凋亡的影响;(4)蛋白免疫印记(Western blotting)、实时定量基因扩增荧光(RT-qPCR)等实验技术,检测CP-673451对A549细胞Nrf2的蛋白表达及mRNA表达的变化,同时检测Nrf2下游靶基因HO-1、NQO-1的mRNA表达情况;采用GSH检测试剂盒,检测外加CP-673451后的A549细胞中总GSH水平;(5)在外加Nrf2激活剂tBHQ后应用流式细胞术、DCFH-DA活性氧检测和GSH试剂盒等技术检测CP-673451引起的A549细胞的凋亡、ROS和GSH含量的变化情况;(6)构建稳定低表达PDGFRβ的A549细胞株,再通过Western blotting、MTT、流式细胞术、Caspase-Glo 3/7、DCFH-DA和GSH试剂盒等技术检测CP-673451对沉默表达PDGFRβ的A549细胞的影响;(7)采用MTT法、流式细胞术、Caspase-Glo3/7、DCFH-DA和GSH检测试剂盒等技术检测CP-673451与顺铂联用对A549细胞毒性的影响。结果:(1)在A549和H358细胞中PDGFRβ均高表达,CP-673451可有效抑制A549和H358细胞中的PDGFRβ的磷酸化水平;CP-673451可抑制NSCLC细胞系(A549和H358细胞)的增殖,但对正常细胞(BEAS-2B细胞)影响较小;(2)CP-673451可以诱导A549细胞凋亡,但在相同剂量范围内对BEAS-2B细胞凋亡影响无显著性差异;CP-673451可明显升高A549细胞中的ROS含量并呈剂量依赖性,在外加抗氧化剂NAC后可拮抗CP-673451诱导的A549细胞的凋亡;(3)CP-673451可以降低A549细胞中Nrf2及其下游靶基因HO-1、NQO-1的表达,且CP-673451可减少A549细胞中GSH的含量;在外加Nrf2激活剂tBHQ后,可逆转CP-673451引起的A549细胞中ROS含量的升高、细胞的凋亡增加和GSH含量的降低;(4)应用数据库分析和实验技术证实了CP-673451通过PI3K/Akt通路抑制Nrf2在A549细胞中的表达;(5)通过构建沉默表达PDGFRβ的A549细胞株的实验证实CP-673451对A549细胞的作用是通过抑制PDGFRβ实现的,从而排除了“脱靶效应”的影响;(6)最后我们的实验证实CP-673451可增敏顺铂对A549细胞毒性作用。结论:(1)PDGFRβ抑制剂CP-673451通过升高A549细胞中的ROS水平引起细胞毒性。(2)该作用是通过抑制PI3K/Akt/Nrf2信号通路而实现的。(3)CP-673451可增敏顺铂对A549细胞的细胞毒性作用。