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目的: 研究大鼠胰腺发育不同阶段基因表达谱,分析胰岛素合成和释放过程中的关键基因表达特点,并明确胚胎发育正常及异常大鼠胰岛素释放功能的完善过程及其胰岛功能异常的机制。 方法: 1、应用显微分离及提取技术获得胚胎发育12.5天(E12.5)、15.5天(E15.5)、18.5天(E18.5)、新生大鼠(N)、出生后21天(P21)及成年(A)SD大鼠的胰腺组织。 2、利用Affymetrix公司生产的高密度寡核苷酸芯片检测大鼠发育各阶段胰腺内外分泌基因表达谱;用生物信息学技术,结合UCSC、TRANSFAC、NCBI等公共数据库进行检索,对各时期芯片结果尤其是胰岛素合成及释放相关基因的表达进行分析;并用RT-PCR及realtime PCR对芯片结果进行验证。 3、运用RT-PCR、Western blot、免疫组化、免疫荧光等技术确定胰岛素释放关键基因的定位及其基因、蛋白表达情况。 4、腹腔葡萄糖耐量试验(IPGTT)检测大鼠胰岛功能,ELISA法测定血中胰岛素浓度。 5、从大鼠胚胎发育14天开始给予孕鼠半量饮食直至新生鼠出生,造成宫内发育迟缓动物模型,宫内发育迟缓新生大鼠出生后,部分给予正常哺乳,部分继续给与半量饮食,观察其体重和胰腺重量的变化,提取宫内发育迟缓新生大鼠胰腺组织,检测胰岛素合成释放相关基因、蛋白的表达;经鼻尖采血收集新生后不同天数的鼠血,腹腔