论文部分内容阅读
本研究采用中性红吞噬法、格里斯(Griess)试验、双抗体夹心法以及荧光定量 PCR(Quantitative real time polymerase chain reaction,qRCR)技术分别测定了巨噬细胞的吞噬能力,增殖能力,一氧化氮(Nitric oxide,NO)的分泌量,乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素 1β(Interleukin 1 beta,IL-1β)的分泌量以及巨噬细胞钙调素(Calmodulin,CaM)、刺激性G蛋白α(Stimulatory GTP-blinding protein alpha,GSα)基因的表达,探索不同浓度的绞股蓝多糖(Gynostemma pentaphyllum polysaccharides,GPP)对小鼠腹腔巨噬细胞的影响,进一步探讨GPP在机体免疫功能的调节作用及其可能的作用机理,为GPP的临床应用和进一步开发提供理论依据。结果表明:1、经GPP处理后的腹腔巨噬细胞吞噬能力都有所增强。不同浓度的GPP刺激小鼠巨噬细胞后,吞噬能力无明显的量效关系,其中GPP的浓度为200μg/mL时,吞噬活性最高,与空白对照组相比差异显著(P<0.05)。2、从腹腔巨噬细胞增殖水平来看,不同浓度的GPP处理组都可以促进小鼠腹腔巨噬细胞增殖。当GPP的浓度达到50μg/mL及以上时,与空白对照组相比差异显著(P<0.05),但其组间差异不明显。3、不同浓度的GPP刺激小鼠腹腔巨噬细胞均能显著促进NO分泌(P<0.05),且NO分泌量随着GPP浓度的增加而增加。4、经各浓度GPP和LPS作用后的小鼠腹腔巨噬细胞,其分泌LDH的量均有所增加,但不呈正相关。其中GPP浓度为50μg/mL和100μg/mL时,与空白对照组相比,差异显著(P<0.05)。5、从TNF-α的分泌水平来看,当GPP的浓度达到25 μg/mL及以上时,巨噬细胞TNF-α的分泌量较对空白照组而言差异显著(P<0.05);且随着GPP浓度的增加,TNF-α的分泌量增加比较明显,当浓度达到100μg/mL时达到最大值,当GPP浓度继续增加时,TNF-α的分泌量下降。6、从IL-1β的分泌量来看,当GPP的浓度达到25 μg/mL及以上时,巨噬细胞的IL-1β分泌量与空白对照组相比显著差异(P<0.05),且随着GPP浓度的增加,IL-1β的分泌量增加比较明显,当GPP为100μg/mL时对IL-1β分泌的促进作用最强(P<0.05),之后IL-1β的分泌量会随着浓度的增加而减少。7、各GPP给药组均可提高小鼠腹腔巨噬细胞钙调素基因的表达,与空白对照组相比,25μg/mL及以上GPP给药组均有显著性差异(P<0.05)。其中GPP浓度在100 μg/mL时CaM基因表达量达到最高,之后CaM基因表达量会随着浓度的增加而降低。8、不同浓度的GPP都可显著提高小鼠腹腔巨噬细胞GSα基因的表达(P<0.05)。其中GPP浓度在25μg/mL时,对小鼠腹腔巨噬细胞GSα基因的表达促进作用最强。结论:GPP对小鼠腹腔巨噬细胞有活化作用,GPP能刺激巨噬细胞增殖从而增加小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力,能提高小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO以及细胞因子LDH、TNF-α和IL-1β,能上调CaM和GSα基因的表达。综合本研究实验结果来看,当GPP浓度为50μg/mL时,效果明显;100 μg/mL时效果最佳。