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目的:髓母细胞瘤(medulloblastoma，MB)是一种比较常见的儿童中枢性的神经系统肿瘤，多在儿童患者3-7岁之间发病，也可累及部分成年患者。临床表现多为颅高压症状，共济失调体征以及脑积水等情况，严重损害着患者的生命健康。目前的治疗手段主要以手术为主，放化疗为辅，但是疗效并不满意。因此，研究MB发病的分子机制，寻找用于治疗分子机制靶点的药物有着重大意义。多数临床及实验室研究发现，MB的产生和发展与Sonic Hedgehog(SHH)信号通路的异常活化有着密切联系。GANT61是SHH信号通路Gli1靶点的特异性抑制剂，它通过抑制SHH下游通路中Gli1的转录表达，阻断SHH信号通路，达到促进MB细胞凋亡的作用。然而，关于GANT61是通过哪些凋亡机制促使MB细胞凋亡以及它与凋亡相关蛋白关系的研究并不多。因此，本研究拟通过GANT61对人髓母细胞株Daoy的诱导凋亡作用来观察GANT61与Gli1以及它与Bcl-2、Caspase9和Casepase3的关系，探讨GANT61促使MB细胞凋亡可能通过的凋亡途径，为阐明Sonic Hedgehog通路中Gli1靶点表达与MB细胞凋亡的联系提供一定的理论依据。 方法:培养人髓母细胞株Daoy细胞，经过GANT61处理分为4组，即空白对照组、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L药物组。采用细胞增殖法检测Daoy细胞在GANT61作用下的增殖数、增殖率以及形态的变化;用AnnexinⅤ-FITC/PI双标染色流式细胞术测定GANT61诱导Daoy细胞凋亡的影响;用细胞侵蚀及迁移法检测GANT61对Daoy细胞转移能力的影响;用qPCR法检测GANT61对Daoy细胞中Gli1和Bcl-2的基因表达量的差异;用Western blot法检测Daoy细胞中Gli1、Bcl-2、Caspase9和Casepase3的蛋白表达水平的差异。 结果:(1)细胞增殖法显示:Daoy细胞在GANT61作用后，细胞增殖数明显减少，细胞间隙增大，异常突起增多;随着GANT61浓度持续升高，Daoy细胞的增殖数及增殖率明显降低，统计学有差异(P＜0.05)，并且具有剂量-效应关系。 (2) AnnexinⅤ-FITC/PI双标法流式细胞术显示:Daoy细胞在经过4组GANT61作用24H后，细胞凋亡率明显升高（P＜0.05），细胞存活率明显下降(P＜0.05)。 (3)细胞侵蚀及迁移法检测显示:Daoy细胞在经过浓度分别为0、10、20、40μmol/L的GANT61作用24H后，Daoy细胞转移能力受到了明显抑制(P＜0.05)，并且具有剂量-效应关系。 (4) qPCR法结果显示:通过比较GANT61组和对照组，Daoy细胞的Gli1和Bcl-2 mRNA的表达明显下降(P＜0.05);提示GANT61能够抑制Gli1基因表达，继而下调下游Bcl-2基因的转录表达，并具有剂量-效应关系。 (5) Western blot法结果显示:GANT61组较对照组Gli1和Bcl-2蛋白表达水平明显下降(P＜0.05);Caspase9和Caspase3蛋白表达水平明显上升(P＜0.05)，说明GANT61抑制Gli1蛋白的表达，下调了Bcl-2的表达，可能通过线粒体凋亡途径活化Caspase9和Caspase3蛋白，上调两种Caspase蛋白的表达。结果显示GANT61对四种蛋白的表达调控具有剂量-效应关系。 结论:GANT61能够明显地抑制MB细胞的增殖生长，促进MB细胞凋亡。并且GANT61能通过抑制Gli1的表达，下调下游Bcl-2的表达，从而活化Caspase9和Caspase3，达到促进MB细胞凋亡的作用。因此，GANT61促进MB细胞凋亡的机制可能与下调Gli1和Bcl-2表达，通过线粒体凋亡途径活化Caspase9和Caspase3蛋白有关。