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目的:建立杭白芷饮片的HPLC指纹图谱,计算相似度;建立杭白芷饮片中欧前胡素和异欧前胡素的含量测定方法,为杭白芷饮片的质量控制和临床应用提供一定的实验依据。
方法:①考察了杭自芷饮片样品的不同提取方法和HPLC的色谱条件;在确定的最佳提取方法和色谱条件下,以欧前胡素为参照峰,建立其HPLC标准指纹图谱,进行方法学考察;计算12个不同产地杭白芷饮片指纹图谱的相似度,比较之间的相似性。②采用反相液相色谱法,Ultimate XB-C18(250 min×4.6 mm,5μm)色谱柱,柱温30℃,乙腈-水(60:40)为流动相,以1.0 mL·min-1的流速于254nm处检测不同产地杭白芷饮片中欧前胡素和异欧前胡素的峰面积,比较它们之间两者的含量差异。
结果:①最佳提取方法为70%乙醇超声30min;最佳色谱条件为色谱柱:UltimateXB-C18(250min×4.6mm,5μm);柱温:30℃;流速:1.0mL·min-1;检测波长:254 nm;流动相:水(A)-乙腈(C)梯度洗脱,洗脱时间70min,起始浓度为95%A-5%C,在50min时达到35%A-65%C,最后在70min时达到5%A-95%C。用该梯度洗脱方法能够得到杭白芷饮片的指纹图谱。对其方法学考察表明,系统适应性试验结果符合指纹图谱的技术要求,杭白芷饮片供试品溶液在24h内基本稳定,指纹图谱重现性好,杭白芷饮片指纹图谱能够反映不同产地杭白芷饮片之间的相似性,指纹图谱相似度均大于0.9。②欧前胡素线性回归方程为:Y=5.53×103X+27.31(r=0.9995),异欧前胡素线性回归方程为:Y=4.68×103X+19.62(r=0.9995),分别在进样量为0.0552~0.276μg和0.0480~0.240μg范围内线性关系良好,平均回收率为98.4%和96.6%。不同产地杭白芷饮片中欧前胡素和异欧前胡素的含量分别在0.046%~0.145%和0.025~,0.087%之间,存在一定的差异。
结论:①筛选出的最佳提取方法简单、快速、提取效率高、提取稳定性好;筛选出的最佳色谱条件简单、分析快速、重复性和稳定性好。建立的不同产地杭白芷饮片的高效液相指纹图谱可用于其质量控制。②建立的不同产地杭白芷饮片中欧前胡素和异欧前胡素的含量测定方法简便可靠、重复性好,可用于杭白芷饮片的质量控制。