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目的: 1.了解温州医学院附属第一医院2008~2011年临床分离鲍曼不动杆菌的感染状况和耐药特性。 2.采用随机扩增多态性DNA基因分型方法监测鲍曼不动杆菌医院感染状况,探讨鲍曼不动杆菌分子流行病学特点。 3.研究鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶相关耐药基因OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58及插入序列ISAba1、ISAba3;对部分基因阳性菌株进行测序分析。 方法: 1.回顾性调查2008~2011年四年间温州医学院附属第一医院临床分离的1423株鲍曼不动杆菌的分布情况及耐药特性。 2.应用随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型方法对100株鲍曼不动杆菌进行分型,通过NTSYSpc软件绘制菌株之间亲缘关系树状图,分析各菌株之间的亲缘关系,统计RAPD各型别在我院临床各科室分布情况。 3.应用改良的Hodge实验对产碳青霉烯酶菌株进行筛查。 4.应用聚合酶链法(PCR)检测200株鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶相关耐药基因OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58及插入序列ISAba1、ISAba3。 5.设计三对引物在进行OXA-23、ISAba1单独功能基因检测和测序的同时,拼接出功能基因组全长序列;基于OXA-58和ISAba3高度相关性,另外设计两对交叉引物在进行OXA-58和ISAba3单独功能基因检测的同时可进行功能基因组的全长拼接。 结果: 1.1423株鲍曼不动杆菌主要来源于痰液,共1354株(95.2%),其次为尿液21株(1.5%)和血液13株(0.9%)。所检到的鲍曼不动杆菌主要来源于呼吸内科、ICU、观察病区、脑外科、神经外科、烧伤外科,超过总分离株的90%,存在着较为明显的病区集中趋势。 2.2008~2011年四年间分离的鲍曼不动杆菌耐药情况十分严重,其中对氨苄西林、头孢唑林、头孢曲松等的耐药率已超过了90%,对头孢哌酮/舒巴坦、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南、多粘菌素等的耐药率相对较低,其中多粘菌素抗菌活性最高,四年耐药率分别为1.1%、2.2%、2.3%和1.5%,无明显递增趋势。 3.选取100株鲍曼不动杆菌进行随机扩增多态性DNA基因分型,共将100株鲍曼不动杆菌分为A-F六个型别,其中B型与C型之间的同源关系最近。我院鲍曼不动杆菌以六个型别中的A型和B型流行为主,其中A型28株,B型24株。 4.应用改良的Hodge实验对200株鲍曼不动杆菌进行碳青霉烯酶表型检测,共检到产碳青霉烯酶阳性菌株162株,阳性率为81.0%。 5.在200株鲍曼不动杆菌中,用PCR方法共检到OXA-23基因组阳性菌株153株,其中与ISAba1同时阳性143株;OXA-24基因组本次试验未检到阳性菌株;200株鲍曼不动杆菌均携带OXA-51基因,其中和OXA-23基因组同时阳性153株;OXA-58基因组阳性菌株共检出8株,ISAba3阳性共检出12株,其中有8株两者同时阳性。 结论: 1.临床分离的鲍曼不动杆菌大多来源于呼吸道感染,其次为尿道感染和血液感染,且主要集中在呼吸内科和ICU等科室。 2.我院分离的鲍曼不动杆菌耐药情况十分严重,对部分抗菌药物呈现高度耐药,且具有明显的多重耐药性。 3.本院鲍曼不动杆菌以A型和B型为主要流行株,个别科室存在着A-F型的科内小流行,存在A型和B型的院内流行。 4.改良的Hodge试验与耐药基因检测有较好的一致性。 5.产OXA-23型碳青霉烯酶是我院鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类抗生素的主要原因,插入序列ISAba1与OXA-23基因的表达密切相关;OXA-58基因与ISAba3基因呈现高度相关性,后者为前者的表达提供启动子。