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目的：在血管内皮抑制素抑制血管新生的条件下,研究补阳还五汤作用于大脑中动脉栓塞脑缺血再灌注模型(Ischemia-Reperfusion ,I/R)大鼠,通过检测血清中血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶(MMP-9)含量,海马区VEGFR-1及微血管密度(MVD),探讨补阳还五汤促进大脑中动脉 I/R模型大鼠缺血损伤区血管新生的机理,为补阳还五汤治疗缺血性脑血管疾病的临床应用提供理论基础。
方法：采用“线栓法”制作大鼠大脑中动脉栓塞I/R模型,动物分为空白对照组(空白组)、假手术组、模型组、血管内皮抑制素组(抑制素组)、补阳还五汤干预抑制素组(干预组)、补阳还五汤组(中药组),每组15只。中药组、干预组自造模前3天开始给予补阳还五汤浓缩液 15ml/kg体重灌胃,假手术组,模型组,抑制素组用等量生理盐水灌胃,每日一次,至造模后 14天,连用17天；抑制素组、干预组造模前两天在立体定位仪下用微量进样器向侧脑室注入血管内皮抑制素
5μL,假手术组、模型组、中药组给予等量生理盐水,之后每隔 3天重复用药一次,至第13天。再灌注第14天所有大鼠腹主动脉取血清,断头取脑。取大脑嗅球后6至11mm的脑组织,用酶联免疫吸附法测定外周血 VEGF及MMP-9的含量,用免疫组化法测定海马区 VEGFR-1表达水平,计数CD34表达水平计算梗死部位微血管密度。
结果：
(1) 神经功能缺损评分,模型组显著高于假手术组、空白组(P<0.01)；与模型组相比：抑制素组大鼠神经功能缺损评分较高、中药组评分低,但无统计学意义；
(2) 与模型组相比：抑制素组微血管密度降低(P<0.05)；干预组、中药组微血管密度显著升高(P<0.01)；
(3) 与模型组相比：抑制素组海马区VEGFR-1较低(P<0.05)；干预组VEGFR-1表达水平升高(P<0.05)；中药组VEGFR-1表达水平显著升高(P<0.01)；(4) 与模型组相比：抑制素组血清VEGF、MMP-9含量降低(P<0.01,P<0.05)；干预组血清VEGF、MMP-9含量升高(P<0.05,P<0.01)；
结论：
(1) 血管内皮抑制素能抑制脑组织VEGFR-1表达水平和外周血VEGF、MMP-9含量,同时减低梗死区微血管密度的增加程度。
(2) 补阳还五汤在脑缺血时的脑保护机制与其上调 VEGFR-1表达水平、及VEGF、MMP-9含量的作用有关。
(3) 对补阳还五汤提取芳香水,并与水煎液减压浓缩,能有效的保留原有药材的有效成分,提高药物的生物利用度,降低灌胃量,便于临床用药。
(4) 通过侧脑室直接注射给药可以使药物直接进入侧脑室,避免在体内流动过程中的损耗,且不用考虑血脑屏障的因素,操作简便易行,且死亡率不高,具有实用性,在研究直接作用于脑神经的药物时,是一种理想的办法。
(5) 应用改进的线栓法制作大脑中动脉栓塞脑缺血再灌注大鼠模型,效果良好,神经功能缺损评分理想,症状与人类脑卒中后表现有相同处。且操作经练习后较易掌握,具有实用性,是制作脑缺血再灌注损伤动物模型的理想方法。