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为提高水稻杂交制种的产量需要割叶和人工辅助授粉以提高不育系的异交结实率。不育系剑叶角度小会阻碍传粉,制种中通常要把雄性不育系的剑叶割去三分之一至二分之一。这个环节不仅需要高强度的劳动,而且需要较高的操作技术避免割到抽出的幼嫩稻穗。另外,割叶造成的损伤对水稻植株的正常生长亦有不利影响。鉴定出使剑叶角度增大的等位基因,是聚合有利基因改良不育系异交性状的基础之一。使用GA3是杂交水稻制种过程中提高不育系异交结实率的一项关键措施,大剂量高浓度的施用GA3不仅会对杂交种产生不利影响,还会污染环境,增加成本。改良不育系的剑叶角度及其对GA3的敏感性,对于研发提高制种产量,降低制种成本的轻型高效制种技术具有重要的实际意义和应用前景。本论文开展了2项研究:一是以38份籼稻为材料,在见穗5%时开始喷施GA3,连续三天每天一次,15天后调查株高、穗颈长、倒一节间长、倒二节间长、倒三节间长和剑叶角度等6个性状的外源GA3敏感性,并根据株高、穗颈长和剑叶角度的GA3敏感性对38份籼稻资源进行聚类分析,根据聚类结果确定这3个性状对GA3敏感性高的材料;并配制剑叶角度对GA3敏感性低的华粳6号和敏感性高的籼恢105杂交组合,获得了构建该组合BIL群体的中间材料。二是以籼稻保持系龙特浦B和剑叶斜下伸的粳香糯A7444及其杂交组合的BC1Fi群体为材料,筛选双亲SSR多态性,鉴定BCiFi群体各单株SSR标记基因型,应用Mapmaker3.0b软件构建该组合的SSR标记连锁图谱,并应用复合区间作图法进行剑叶角度QTL定位;通过回交和自交获得了构建该组合BIL群体的中间材料和培育龙特浦B剑叶斜下伸近等基因系的中间材料。主要结果如下:
1.38份籼稻资源6个性状对外源GA3均敏感,但不同性状间敏感性程度有差异。鉴定出了株高、穗颈长和剑叶角度对GA3敏感性高的材料。
(1)与喷水对照相比,GA3处理后株高平均增高32.5±7.8cm,穗颈长平均增长3.5±3.3cm,剑叶角度平均增大12.8±10.8°,倒一节间平均增长3.5±3.1cm,倒二节间平均增长16.4±4.4cm,倒三节间平均增长8.2±5.1cm。
(2)绝大部分品种倒二节间长性状对GA3敏感性高于倒一节间长和倒三节间长。
(3)株高对外源GA3敏感性高的是扬稻6号、Rf838等8个品种;株高对外源GA3敏感性低的是川5籼、盐恢559、培矮64S等18个品种;轮改恢、中籼130、明恢63等12个品种株高对外源GA3敏感性为中间型。
(4)穗颈长对外源GA3敏感性高的是中籼糯、中籼130和扬稻6号;穗颈长对外源GA3敏感性低的是明恢63、盐恢559等27个品种;轮改恢、培矮64S等8个品种穗颈长对外源GA3敏感性为中间型。
(5)剑叶角度对外源GA3敏感性高的是滇屯502选早;剑叶角度对外源GA3敏感性低的是盐恢559、明恢63、培矮64S等34个品种;川籼、中籼糯和Rf838剑叶角度对GA3敏感性处于中间类型。
(6)获得剑叶角度对GA3不敏感品种华粳6号和敏感品种籼恢105组合BC1F2代405个单穗种子,供进一步构建BIL群体用。
2.龙特浦B和A7444之间SSR多态率为42.0%。构建的SSR遗传图谱全长1905.1cM。在龙特浦B/A7444//龙特浦B组合BCiFi群体中检测到3个控制剑叶角度的QTL。
(1)在筛选的350对SSR引物中,龙特浦B与A7444之间表现多态的引物为147对,多态率为42.0%。其中多态率最高的是第3染色体,达62.5%;最低的是第9染色体,为31.0%。经×2测验,147对标记引物在BCiFi群体中发生偏分离的有14对(P<0.05),占总标记数的9.5%,分布于1、2、3、4、6、11和12染色体上。
(2)在龙特浦B/A7444//龙特浦B组合的BC1F1群体中,轮回亲本背景回复率最高的单株为84.47%,最低的单株为60.23%,116株平均为75.10%。
(3)应用Mapmaker3.0b软件构建的SSR标记遗传连锁图谱全长1905.1cM,包含18个连锁群130个标记信息位点,平均图距为14.7cM。第9染色体最短77.8cM,第2染色体最长265.4cM。第5、第9和第10染色体标记数分别仅为8对,第6染色体标记数最多,为15对。除了1、2、7、9、10和12染色体外,其它染色体均有一个空隙(gap)。在该图谱构建中有17个标记未能进入连锁群,它们分布于1、2、3、4、5、7、8、9、10、11染色体上。
(4)在第1和4两条染色体上共检测到3个控制剑叶角度的QTL。qFLA-la位于标记RM1-RM259之间,与标记RM1的距离是0.01cM,解释表型变异12.62%,加性效应是23.83,增效等位基因来自A7444。qFLA-lb位于RM5-RM246之间,距离RM5最近标记10.01cM,解释表型变异为18.49%,加性效应是-25.02,增效等位基因来自龙特浦B。qFLA-4位于RM6250-RM252之间,距最近RM252标记1.49cM,解释表型变异为11.74%,加性效应是19.77,增效等位基因来自A7444。
(5)获得了龙特浦B/A7444//龙特浦B组合105个BC1F3代单株种子和5个BC2F1家系自交所得的87个BC2F2家系种子。
1.38份籼稻资源6个性状对外源GA3均敏感,但不同性状间敏感性程度有差异。鉴定出了株高、穗颈长和剑叶角度对GA3敏感性高的材料。
(1)与喷水对照相比,GA3处理后株高平均增高32.5±7.8cm,穗颈长平均增长3.5±3.3cm,剑叶角度平均增大12.8±10.8°,倒一节间平均增长3.5±3.1cm,倒二节间平均增长16.4±4.4cm,倒三节间平均增长8.2±5.1cm。
(2)绝大部分品种倒二节间长性状对GA3敏感性高于倒一节间长和倒三节间长。
(3)株高对外源GA3敏感性高的是扬稻6号、Rf838等8个品种;株高对外源GA3敏感性低的是川5籼、盐恢559、培矮64S等18个品种;轮改恢、中籼130、明恢63等12个品种株高对外源GA3敏感性为中间型。
(4)穗颈长对外源GA3敏感性高的是中籼糯、中籼130和扬稻6号;穗颈长对外源GA3敏感性低的是明恢63、盐恢559等27个品种;轮改恢、培矮64S等8个品种穗颈长对外源GA3敏感性为中间型。
(5)剑叶角度对外源GA3敏感性高的是滇屯502选早;剑叶角度对外源GA3敏感性低的是盐恢559、明恢63、培矮64S等34个品种;川籼、中籼糯和Rf838剑叶角度对GA3敏感性处于中间类型。
(6)获得剑叶角度对GA3不敏感品种华粳6号和敏感品种籼恢105组合BC1F2代405个单穗种子,供进一步构建BIL群体用。
2.龙特浦B和A7444之间SSR多态率为42.0%。构建的SSR遗传图谱全长1905.1cM。在龙特浦B/A7444//龙特浦B组合BCiFi群体中检测到3个控制剑叶角度的QTL。
(1)在筛选的350对SSR引物中,龙特浦B与A7444之间表现多态的引物为147对,多态率为42.0%。其中多态率最高的是第3染色体,达62.5%;最低的是第9染色体,为31.0%。经×2测验,147对标记引物在BCiFi群体中发生偏分离的有14对(P<0.05),占总标记数的9.5%,分布于1、2、3、4、6、11和12染色体上。
(2)在龙特浦B/A7444//龙特浦B组合的BC1F1群体中,轮回亲本背景回复率最高的单株为84.47%,最低的单株为60.23%,116株平均为75.10%。
(3)应用Mapmaker3.0b软件构建的SSR标记遗传连锁图谱全长1905.1cM,包含18个连锁群130个标记信息位点,平均图距为14.7cM。第9染色体最短77.8cM,第2染色体最长265.4cM。第5、第9和第10染色体标记数分别仅为8对,第6染色体标记数最多,为15对。除了1、2、7、9、10和12染色体外,其它染色体均有一个空隙(gap)。在该图谱构建中有17个标记未能进入连锁群,它们分布于1、2、3、4、5、7、8、9、10、11染色体上。
(4)在第1和4两条染色体上共检测到3个控制剑叶角度的QTL。qFLA-la位于标记RM1-RM259之间,与标记RM1的距离是0.01cM,解释表型变异12.62%,加性效应是23.83,增效等位基因来自A7444。qFLA-lb位于RM5-RM246之间,距离RM5最近标记10.01cM,解释表型变异为18.49%,加性效应是-25.02,增效等位基因来自龙特浦B。qFLA-4位于RM6250-RM252之间,距最近RM252标记1.49cM,解释表型变异为11.74%,加性效应是19.77,增效等位基因来自A7444。
(5)获得了龙特浦B/A7444//龙特浦B组合105个BC1F3代单株种子和5个BC2F1家系自交所得的87个BC2F2家系种子。