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GRAS转录因子是近年来发现的一种高等植物所特有的转录因子家族。其命名来源于其功能成员GAI(gibberellicacid insensitive)、RGA(repressor of GA1-3 mutant)和SCR(scarecrow)。目前,忆在拟南芥基因组中鉴定得到了33个GRAS家族基因,如d8、Rht、PAT1、SCL13和SCL14等基因,,并对部分基因的功能进行了分析。但对木本植物GRAS转录因子的功能研究较少。本研究通过对柽柳转录组文库进行分析,克隆获得了 20个GRAS转录因子。对不同文库中GRAS转录因子表达分析,结果发现其中一个GRAS基因转录水平在盐胁迫后显著升高,NaCl胁迫12 h后表达量为对照的62.41倍。因此选取该基因进行后续研究,并将该基因命名为ThGRAS1。将ThGRAS1基因与GFP蛋白融合后,利用基因枪技术瞬时表达于洋葱表皮细胞对其进行亚细胞定位,发现该基因定位于细胞核。将ThGRAS1构建植物过表达载体35S::ThGRAS1,利用农杆菌介导的蘸花法将重组载体转入拟南芥,对转基因拟南芥中的ThGRAS7的表达进行分析,确认其确实过表达。培养至T3代,进行相关实验分析。发芽率和生长压力试验结果表明,转ThGRAS1基因拟南芥在盐胁迫条件下具有较好的发芽率和生物量积累。组织化学染色发现,过表达ThGRAS1拟南芥在盐胁迫下积累的活性氧较野生型少、所受到的细胞损伤较轻。进一步的生理指标结果显示,非胁迫条件下,转基因和非转基因株系的电导率、MDA含量等无显著差别,而NaCl胁迫后,转基因株系的MDA积累和相对电导率、H202含量明显低于对照。这些结果表明,过表达ThGRAS1明显增强了转基因拟南芥的盐胁迫耐受能力。为了验证ThGRAS1转录因子基因在拟南芥中异源表达的结果,利用瞬时表达方法将ThGRAS1过表达载体、抑制表达载体、空载体分别转入柽柳,对这些株系进行NaCl胁迫后相关指标分析。结果与转基因拟南芥的表现相似。表明过表达ThGRAS1也能有效提高转基因柽柳的耐盐能力,一定程度验证了外源过表达ThGRAS1的耐盐调控能力。为了初步分析ThGRAS1转录因子基因耐盐调控的上游机制,利用侧翼序列克隆技术克隆获得了 ThGRAS1上游1180 bp启动子序列,将其与GUS融合构建植物表达载体pBI121-ThGRAS1-GUS,通过农杆菌介导的蘸花法转化拟南芥,对T4株系不同生长发育时期及不同组织部位进行GUS染色。结果表明,ThGRAS1启动子在成熟期的叶、根和未成熟荚果具有GUS表达活性,体现了该基因的时空表达特性。利用PLACE在线分析软件对ThGRAS1上游1180 bp启动子序列分析,发现该启动子 含 有 CACTFTPPCA1、CAATBOX1、ABRELATERD1、ARR1AT、ASF1MOTIFCAMV、DOFCOREZM、GT1 CONSENSUS、MYBCOREATCYCB1、ROOTMOTIFTAPOX1等与植物抗逆相关的顺式作用元件。利用酵母单杂交技术筛选获得可分别特异识别ThGRAS1基因启动子中的DOF、NOD元件的上游调控基因ThDof19和ThNod2。初步证实ThDof19和ThNod2可能参与调控或者共同与ThGRAS1来完成植株的耐盐调控。