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目的：本研究重点探讨琼玉膏通过调节PI3K/Akt信号通路对D-半乳糖致衰大鼠脾脏的机制研究。在前期的实验中已经筛选出琼玉膏作用于衰老大鼠脾脏,与衰老有关的靶基因或蛋白,本实验将利用荧光定量PCR、免疫组化(IHC)及免疫印迹(WB)的方法,通过对这几个候选靶基因及蛋白所在通路进行分析其蛋白表达情况,望能通过此实验进一步探索琼玉膏延缓衰老作用机理,为琼玉膏的研究和开发提供一定的理论与实验依据。方法：将42只SD大鼠随机分为三组：空白组、模型组(D-半乳糖致衰)和琼玉组(D-半乳糖致衰+琼玉膏治疗)。每天用D-gal(250毫克/公斤)和琼玉膏(14g/kg)治疗,连续62天后,采用Morris圆形水迷宫实验测试方法来测量大鼠空间学习和记忆能力,并用HE染色来观察脾脏的病理变化,采用荧光定量PCR和免疫印迹法(WB)检测脾脏组织HSPBP1和TIMM8B mRNA和蛋白表达情况,通过免疫组织化学方法检测脾脏组织差异蛋白质P-Akt、P-mTOR. Caspase-3、Nrf2和P53的表达情况。结果：一、亚急性衰老大鼠模型建立评估,Morri s圆形水迷宫实验测试。与空白组相比,模型组在第3、4、5和6天登上平台的时间都明显增加(P＜0.05),潜伏期呈下降趋势；与模型组相比,琼玉膏组在第3、4、5和6天登上平台的时间都明显缩短(P＜0.05),且潜伏期呈下降趋势；空白组和琼玉膏组之间无明显差异。二、荧光定量PCR检测衰老大鼠脾脏组织HSPBPl, TIMM8B mRNA的表达。与空白组比较,模型组HSPBPl mRNA的表达明显升高(P＜0.01), TIMM8B mRNA的表达明显下降(P＜0.05)；与模型组比较,琼玉膏组HSPBP1 mRNA的表达明显下降(P＜0.01), TIMM8B mRNA的表达明显升高(P＜0.05)；空白组和琼玉膏组HSPBP1和TIMM8B mRNA的表达无明显差异。三、Western Blotting检测衰老大鼠脾脏组织HSPBP1、TIMM8B蛋白的表达与空白组比较,模型组HSPBP1蛋白的表达明显升高(尺0.01),TIMM8B蛋白的表达明显下降(P＜0.001)；与模型组比较,琼玉膏组HSPBP1蛋白的表达明显下降(P＜0.01).TIMM8B蛋白的表达明显升高(P<O.001)；空白组和琼玉膏组HSPBP1蛋白的表达无明显差异,TIMM8B蛋白的表达有明显差异(P＜0.001)。四、immunohi stochemi stry检测衰老大鼠脾脏组织P-AktxP-mT0R、Caspase-3、 Nrf2和P53蛋白表达的结果与空白组相比,模型组P-Akt和P-mTOR蛋白的表达显著下降(P＜.01),caspase-3.p53和Nrf2蛋白的表达显著升高(P＜0.01)；与模型组相比,琼玉膏组P-Akt.P-mTOR和Nrf2蛋白的表达显著上升(P＜0.01)；caspase-3和p53蛋白的表达水平显著下降(P＜0.01)。结论：一、亚急性衰老大鼠模型建立成功,琼玉膏具有改善衰老大鼠学习记忆能力。二、琼玉膏能够下调HSPBPl mRNh及蛋白的表达,能上调TIMM8B mRNA及蛋白的表达。三、琼玉膏能够上调P-Akt.P-mTOR和Nrf2蛋白的表达,下调P53蛋白和Caspase-3蛋白,发挥抗细胞凋亡作用。本实验研究表明琼玉膏能够激活D-半乳糖致衰大鼠脾脏PI3K／Akt信号通路发挥抗衰老作用。