肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是肝脏原发性恶性肿瘤，其发生和发展与调节细胞增殖、分化的生长因子和转录因子有着极为密切的关系。同源盒蛋白家族中的造血细胞特异表达同源盒基因(hematopoietically expressed homeobox，Hhex)编码的蛋白作为一种转录因子，不仅参与多种器官发育和分化的过程，而且对肝芽的形成以及肝系和胆系的分化都具有相当重要的作用。成体肝脏中，Hhex仅在成熟的肝细胞中表达，具有维持肝细胞分化的作用。最近有研究表明，多种组织恶性病变的发生都与Hhex异常表达有关，例如人类白血病的发生与Hhex的低表达有关，T淋巴细胞瘤的发生则与Hhex的过表达相关。但是，关于Hhex与肝细胞癌发生的相关研究较少。已有研究显示，Hhex mRNA在高分化的肝癌细胞系表达量较高，在低分化的肝癌细胞系不表达。本研究旨在探讨Hhex的表达与肝细胞癌发生、发展之间的关系，以期为揭示肝脏肿瘤发生的机制奠定基础，并为肝细胞癌的治疗和诊断提供新的靶点。　　 本研究在小鼠肝癌细胞系Hepa1—6中采用腺病毒转染系统来介导Hhex表达，观察Hhex对Hepa1—6细胞的体外生物学特性及体内成瘤能力的影响，并在42例人肝细胞癌组织中分析了HHEX的表达与不同分化状态的肝细胞癌间的关系，结果如下：　　 一、Hhex能够抑制Hepa1—6细胞的体外生长和克隆形成率　　 运用携带Hhex基因的腺病毒载体(命名为Ad—Hhex)感染293LP细胞后，通过RT—PCR和Western Blot的方法可以检测到Ad—Hhex感染的Hepa1—6细胞中含有目的基因与蛋白，但是对照组没有检测到。光镜观察Ad—Hhex感染的Hepa1—6细胞变大，多核细胞率增多，核质比降低。MTT法对生长曲线的分析比较发现Hhex可以明显抑制Hepa1—6细胞的增殖。检测体外克隆形成率分析显示Ad—Hhex感染的Hepa1—6细胞的克隆形成率明显低于对照组。流式细胞分析也证明了Ad—Hhex感染的Hepa1—6细胞的凋亡率多于对照组。以上结果表明Hhex对小鼠肝癌细胞系Hepa1—6的体外增殖具有抑制作用。　　 二、Hhex可以诱导Hepa1—6细胞的部分分化并降低EpCAM阳性率　　 通过RT—PCR检测Ad—Hhex感染的Hepa1—6细胞中的抑癌基因(如P53、Rb)表达上调，原癌基因(如c—Jun、Bc12)表达下调。肝系标志(如ALB、GS、TAT、Pck1和Cypla2)和胆系标志(CK7和CK19)以及肝脏早期发育相关性基因(AFP和HNF4α)的表达均上调，结果显示Hhex可以诱导Hepa1—6的部分分化，进一步提示Hhex可以减弱Hepa1—6的恶变程度。同时，细胞免疫化学分析一个肝癌“干细胞”候选指标EpCAM在Hepa1—6细胞中的表达，结果显示Ad—Hhex感染的Hepa1—6细胞中EpCAM的阳性细胞率低于对照组。　　 三、Hhex抑制Hepa1—6细胞的体内成瘤能力　　 为了评估Hhex对体内肿瘤形成的影响，将Ad—Hhex感染的Hepa1—6和空病毒感染的Hepa1—6细胞(对照组)分别注入裸鼠腹部两侧。9天后，在注射部位发现肉眼可见的肿瘤，但注射感染Ad—Hhex的Hepa1—6细胞部位的肿瘤生长速度明显慢于注射对照组部位生长的肿瘤速度。11天后，注射对照组的部位发现明显坏死、溃烂的组织，但注射Ad—Hhex感染的Hepa1—6细胞部位没有出现坏死、溃烂的组织。13天后，对不同部位生长的肿瘤计数，结果显示注射Ad—Hhex感染的Hepa1—6细胞部位所生长的肿瘤数量少于注射对照组部位生长的肿瘤数量。　　 四、在不同分化状态的肝细胞癌中HHEX表达水平不同　　 为了探求HHEX与不同分化状态的肝细胞癌的关系，通过免疫组织化学的方法分析42例不同分化状态人肝细胞癌中HHEX的表达情况。结果显示HHEX在肝细胞癌的癌旁组织(n=19)与高分化肝细胞癌(n=8)的胞浆中高表达，在部分低分化肝细胞癌的胞浆中低表达或者不表达(n=13)，在少数低分化肝细胞癌(n=2)的胞核中表达。该结果提示HHEX在胞浆中的表达可能与肝细胞癌的分化状态具有正相关性。　　 本研究通过腺病毒转染系统使Hhex基因能够在小鼠肝癌细胞系Hepa1—6中高效的表达；证明Hhex基因过表达可以使小鼠肝癌细胞系Hepa1—6恶变程度降低(生长抑制、成熟的分子标志表达增强，原癌基因标志表达减少，抑癌基因标志表达增强等)；人肝细胞癌免疫组织化学分析显示HHEX在胞浆中的表达可能与肝细胞癌的分化程度具有正相关性。本研究的结果可能为肝细胞癌的发生、发展的机制研究提供线索，也可能为临床上肝细胞癌的诊断治疗提供新的指标。