蛋白质与效应分子相互作用的研究

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1、细胞色素c和心磷脂的相互作用以及钙离子对这一作用的影响。 细胞色素c(Cyt c)在心磷脂(CL)修饰的电极上具有很好的电化学活性,其氧化还原峰电位可接近O,且在0.5μm的浓度下便可得到电子传递响应。进一步研究发现,Cyt c的氧化还原峰随着反应液中Ca2+浓度的升高而降低,但当加入等量的EDTA后,峰电流又可还原。通过与对照实验比较可以知道,Cyt c通过其赖氨酸-NH3+基团与CL的—P02基团发生静电引力相互作用,Ca2+可结合—P02基团从而引起Cyt c从CL层上脱离。研究表明,Ca2+与—PO2基团的结合可能是线粒体内Cyt c释放的一个原因。 2、钙离子对辣根过氧化物酶同工酶C结构和催化活性影响的研究。 通过比较辣根过氧化物酶同工酶C(HRPC)中Ca2+移除前后的HRPC的各种性质,研究了Ca2+对HRPC的重要作用。移除Ca2+后的HRPC的紫外可见吸收光谱图发生了变化,Soret带的最大特征吸收峰以及a带和β带特征吸收峰均发生不同程度的蓝移和峰强减弱,表明其血红素微环境及结构发生了变化。移除Ca2+后的HRPC也可在膜修饰电极上表现出对H2O2的催化响应,但是天然的HRPC比去除Ca2+后的蛋白对H2O2表现出更低的检测限、更宽的检测范围以及更高的灵敏度,且对H2O2的抑制作用也有更强的耐受性,酶本身的稳定性也更好。实验结果表明,Ca2+对HRPC血红素微环境的保持、催化活性和稳定性均有重要的作用。 3、过氧化氢对D-氨基酸氧化酶催化活性影响的研究。 D-氨基酸氧化酶(DAAO)酶活性变化以及D-氨基酸的浓度在体内均有重要的作用,为此,作者首先采用PEI修饰电极,得到了DAAO的电子传递响应,并进一步研究了过氧化氢对DAAO的催化活性的影响。反应体系中加入底物D-氨基酸之后,DAAO氧化还原电流随着D-氨基酸浓度的增加而降低,而对L-氨基酸没有类似的响应。DAAO对不同的D-氨基酸催化特异性也不同,对一些含疏水支链的D-氨基酸作用更明显(如D-丙氨酸、D-异亮氨酸、D-甲硫氨酸),而对亲水性氨基酸(如D-丝氨酸)的灵敏度较低。作者以D-丝氨酸作为模型,研究了H2O2对DAAO活性的影响。实验结果表明,与.H2O2作用后,DAAO对D-氨基酸的催化活性有所降低,这可能是导致体内D-氨基酸浓度上升的原因。 4、氯离子对血红蛋白别构效应的电化学研究。 采用电化学手段研究了血红蛋白的氯离子别构效应,获得了在氯离子存在的条件下在裸金电极以及4,4-联吡啶修饰的金电极表面上的血红蛋白直接电化学响应。随着溶液中氯离子浓度的增加,直接电化学的可逆性变好,半波电位(E1/2)负移。光谱学研究表明氯离子的存在没有使血红蛋白变性。氯离子可能通过进入血红蛋白的血红素空穴,中和空穴中的多余的正电荷,扩展血红素空穴从而改变血红素辅基周围的结构。研究表明,氯离子和血红蛋白的结合既有特异性结合又有非特异性结合。当氯离子浓度很低时,主要是特异性结合。随着氯离子浓度的升高,氯离子和血红蛋白的结合主要是低亲和力的结合。同时,氯离子促进了血红蛋白和电极之间的电子传递过程。 5、乙醇对血红素类蛋白电子传递和催化活性的影响。 研究了乙醇对血红素类蛋白(以肌红蛋白为例)的电子传递性质和电催化活性的影响。通过考察肌红蛋白(Mb)的直接电化学响应,发现乙醇的存在可以促进血红素在电极上的电子传递以及催化O2的灵敏度。紫外吸收光谱显示,乙醇含量不超过20%时将不会改变Mb的结构。乙醇含量为0-20%时,Mb对H2O2的电催化活性的结果显示,催化峰电流随着乙醇浓度的增加而增大,表明少量乙醇的存在可以增强Mb对H2O2的电催化能力。
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