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目的：大肠癌是我国最常见的消化道恶性肿瘤之一,且有上升的趋势,严重危害了广大人民群众的健康。大肠癌主要的治疗手段是手术,辅助化疗在大肠癌,特别是中晚期大肠癌的治疗及预防复发转移的综合治疗方案中具有十分重要的地位。然而,肿瘤细胞对多种化疗药物耐药的问题,即多药耐药(multidrug resistance, MDR)已成为包括大肠癌在内的各种恶性肿瘤治疗中最大的难题,它是部分肿瘤化疗失败的主要原因。多药耐药性(MDR)是指肿瘤细胞对一种化疗药物产生耐药后,会对非同类结构、细胞靶点和作用机理不同的其它抗肿瘤药物同时产生耐药性。本研究研究多药耐药(MDR1)基因沉默对MDR1mRNA的表达、大肠癌耐药细胞株的生长增殖以及对化疗药物敏感性的影响,探讨RNA干扰技术对大肠癌耐药细胞系LoVo／5-Fu耐药性的逆转作用。方法：构建靶向MDR1的短发夹RNA(EASY-shRNA-MDR1)干扰质粒转染人大肠癌耐药细胞系LoVo／5-Fu,应用实时荧光定量PCR (Realtime-PCR)在mRNA水平检测对MDR1mRNA表达的抑制效果,应用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞对5-Fu的敏感性,应用流式细胞仪检测MDR1基因沉默后细胞的凋亡情况,并分析各组细胞结果之间的差别。实验结果用SAS 9.13统计软件分析。结果：1、细胞转染：质粒载体含编码绿色荧光蛋白(GFP)的基因,所以转染细胞在荧光显微镜下可激发绿色荧光。相同视野,不同光线下分别计数细胞数,转染率为60%。2、shRNA转染对各组细胞MDR1mRNA的表达影响：PCR产物的确定性分析：熔解曲线分析显示,MDR1基因产物的熔解曲线峰值在87.6℃。溶解温度均一,峰形较尖锐。细胞经shRNA作用48h后,EASY-shRNA-MDR1组细胞MDR1mRNA表达量为[(7.25±1.48)×107]拷贝／μgRNA,未转染组MDR1mRNA表达量为[(8.63±1.94)×108]拷贝／μgRNA,对照组MDR1mRNA表达量为[(8.17±1.73)×108]拷贝／μgRNA,EASY-shRNA-MDRl组细胞MDR1mRNA表达较未转染组及对照组明显下调(P<0.05),对照质粒组与未转染组细胞MDR1mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。3、shRNA转染后细胞对5-Fu敏感性的变化：MTT检测显示,与未转染组LoVo／5-Fu亲本细胞(IC50为6.753±0.48μmol／ml)相比,EASY-shRNA-MDR1组细胞对5-Fu的IC50(2.014±0.56μmol／ml)显著降低(P<0.05),相对逆转率为74.7%,而对照组细胞的IC50(6.451±0.87μmol／ml)无显著差异(P>0.05),相对逆转率仅为4.8%。未转染组LoVo／5-Fu亲本细胞对5-Fu的RI为16,转染后EASY-shRNA-MDR1组细胞的RI降为5,对照组细胞的RI为15。4、shRNA转染对细胞凋亡率的影响：流式细胞仪分析shRNA干扰MDR1基因72h后,与5-Fu(2.5μg／ml)共同孵育6h诱导凋亡,利用流式细胞仪分析,未转染组的凋亡率为(5.67±0.78)%,对照组的凋亡率为(5.82±1.05)%,两组凋亡率间差异无显著性意义(P>0.05)；EASY-shRNA-MDR1转染组凋亡率为(19.25±1.41)%,较其它两组高(P<0.05)。结论：1、转染EASY-shRNA-MDR1沉默MDR1基因后有效抑制了大肠癌耐药细胞LoVo／5-Fu中MDR1的表达。2、MDR1的表达减少显著提高了大肠癌耐药株LoVo／5-Fu对5-Fu的药物敏感性,降低了大肠癌耐药株LoVo／5-Fu对5-Fu的耐药性。3、RNA干扰技术沉默MDR1基因成功逆转了大肠癌耐药细胞株LoVo／5-Fu的耐药性。