论文部分内容阅读
目的:探讨不同CO2缺血预处理压力及次数分别对大鼠建立人工气腹后肝脏、肾脏缺血/再灌注损伤的影响。方法:一、不同缺血预处理压力对CO2气腹模型大鼠肝脏缺血/再灌注损伤的影响。成年健康雄性SD大鼠30只,随机分为五组(n=6):空白对照(C)组,麻醉后只插入气腹针;气腹对照(Pp)组,以10 mmHg压力建立CO2气腹,持续60 min;低压预处理组(L-IP组)、中压预处理(M-IP)组、高压预处理(H-IP)组在建立CO2气腹前,分别以5、10、15 mmHg充气5 min放气5 min,均连续3个循环。各组恢复内脏灌注60 min后提取肝组织,分别行HE染色光学显微镜下观察肝组织病理改变;分光光度法检测超氧化歧化酶(SOD)活性、总抗氧化物能力(T-AOC)及丙二醛(MDA)含量;免疫组化、Western blot法检测Bcl-2、Bax蛋白表达水平;RT-PCR法检测IL-1β、IL-6 mRNA表达水平。二、不同缺血预处理次数对CO2气腹模型大鼠肾脏缺血/再灌注损伤的影响。成年健康雄性SD大鼠30只,随机分为五组(n=6):假手术对照(Sham)组,气腹(Pp)组,缺血预处理1次(IP1)组,缺血预处理3次(IP3)组,缺血预处理5次(IP5)组。Sham组接受假手术,其余各组以10mmHg气腹压力建立CO2气腹模型,持续时间60 min,另外ip1、ip3及ip5组在气腹前以10mmhg压力,充气5min放气5min,分别连续1、3及5个循环,各组恢复灌注60min后提取肾组织,光学显微镜下观察各组肾组织病理变化,分光光度法检测sod活性、t-aoc及mda含量,免疫组织化学和westernblot方法检测bcl-2和bax蛋白表达情况。结果:一、1.肝脏病理形态学提示,除c组外,pp组与各ip组大鼠肝组织均出现结构改变,表现为肝小叶结构紊乱,肝血窦狭窄,肝细胞胞质疏松呈空泡状变性,胞质及核深染,中央静脉及汇管区中性粒细胞的浸润,其中各ip组的损伤程度轻于pp组。2.氧化应激结果显示,与c组比较,pp组sod活性、t-aoc明显降低,mda含量升高(均p<0.05);与pp组比较,各ip组sod活性、t-aoc明显升高(均p<0.05),mda含量下降;ip组间比较,m-ip组sod活性升高(vsl-ip,p>0.05;vsh-ip,p<0.05)、t-aoc增强,mda含量减少(均p<0.05)。3.免疫组织化学和westernblot结果显示,与c组比较,pp组bcl-2、bax蛋白表达均上调,但bcl-2/bax比值明显下降(均p<0.05);与pp组相比,各ip组bcl-2蛋白表达上调,bax蛋白表达下调(均p<0.05),bcl-2/bax比值升高;ip组间比较,m-ip组bcl-2表达增多(均p<0.05),bax表达量减少(vsl-ip,p>0.05;vsh-ip,p<0.05),bcl-2/bax比值升高(均p<0.05)。4.rt-pcr结果显示,与c组比较,pp组il-1β、il-6mrna表达上调(均p<0.05);与pp组比较,各ip组il-1β、il-6mrna表达下调(均p<0.05);ip组内比较,m-ip组il-1β、il-6mrna相对表达量低于l-ip、h-ip组(均p<0.05)。二、1.大鼠肾组织病理形态学显示,pp组肾小管上皮细胞水肿明显、甚至出现变性坏死,管腔普遍扩张,肾间质中性粒细胞浸润,而各IP组肾损伤程度明显减轻。2.氧化应激结果显示,与Sham组比较,Pp组SOD活性及T-AOC显著降低,MDA水平升高(均P<0.05);与Pp组相比,各IP组SOD及T-AOC增加,MDA减少(均P<0.05);IP组间比较,IP3组SOD增加(均P<0.05),T-AOC增加(vs IP1,P<0.05;vs IP5,P>0.05),MDA减少(vs IP1,P<0.05;vs IP5,P>0.05)。3.免疫组织化学和Western blot结果显示,与Sham组比较,Pp组Bcl-2蛋白表达上调(P>0.05)、Bax蛋白的表达上调(P<0.05);与Pp组比较,各IP组Bcl-2表达上调,Bax表达下调,Bcl-2/Bax比值升高(均P<0.05);IP组间比较,IP3组Bcl-2表达上调(vs IP1,P>0.05;vs IP5,P<0.05),Bax表达下调,Bcl-2/Bax比值升高(均P<0.05)。结论:CO2缺血预处理可减轻气腹模型大鼠肝脏、肾脏缺血/再灌注损伤,其中10 mmHg压力的CO2预处理方法抗肝脏损伤作用更明显,3个循环次数的CO2预处理方法抗肾损伤作用更明显。其机制均与缺血预处理减弱氧化应激反应,上调Bcl-2抗凋亡蛋白表达,下调Bax促凋亡蛋白表达以增加Bcl-2/Bax比值,减少细胞凋亡有关。另外不同次数预处理的抗肝损伤作用还与其下调炎症细胞因子IL-1β、IL-6 mRNA的表达以降低炎性反应有关。