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以两种太湖地区水稻土为供试土样,首先,通过外加有机碳源(0.02mol/L丙酮酸)的培养直接验证了供试土样具有明显的异养硝化能力;然后,通过不同的计数方法对供试土样中的硝化细菌进行了计数,间接证明了异养硝化作用和异养硝化微生物的广泛存在,在计数的同时分离得到了一大批具有硝化能力的异养菌株。确定了异养硝化微生物和异养硝化作用在自然生境中的重要性和普遍性。
以牛肉膏蛋白胨平板直接分离上述土样中的异养硝化细菌,其中强活性菌株NH-2经鉴定为假坚强芽孢杆菌(Bacillus pseudofirmus),以其为模本进行了以下的后续研究。
研究了菌株NH-2在不同培养条件(不同碳源、不同浓度同一碳源、铁离子和氧气)对菌株生长和硝化活性的影响,确认不同碳源及不同的碳源浓度时菌株生长和硝化活性的差异,氮代谢途径产物的多样性和水体脱氮的潜力。实验结果表明:
经加富培养后土壤悬液以牛肉膏蛋白胨平板直接分离、纯化获得了大量的具有氨氧化能力的异养菌株。经过鉴定的具有代表性的异养硝化菌株主要集中于芽孢杆菌属。
铁离子对菌株的硝化活性具有关键性影响,碳源的种类也影响菌株NH-2硝化活性表现的强度。以葡萄糖为碳源时,由于葡萄糖代谢产酸导致培养基基质pH值下降。这可能是在未干预培养基基质pH值的情况下,以葡萄糖为碳源的培养仅发生菌体生长,不发生硝化作用的原因。以丙酮酸为碳源时,氧气对菌株NH-2的生长和硝化活性的影响并不明显。
以不同浓度的丙酮酸为碳源时发现:随着碳源浓度(C/N)的提高,亚硝酸盐的积累反而下降;不同浓度的培养均有全氮的损失(丙酮酸0.016mol/L以上),全氮损失可以达到35%以上。损失途径可能有两条:因培养过程中pH值升高而导致的氨态氮挥发和硝化细菌氮代谢造成的气态N<,2>逸失。
菌株NH-2具有较强的硝酸盐还原能力,同时也能利用高浓度亚硝酸盐,但亚硝酸盐的去向不是十分清楚,其具有利用亚硝酸盐的潜力。
在提高C/N时,异养硝化菌株的培养所造成的全氮损失为去除水体中的铵态氮提供了一个新的思路。