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目的:本课题对斑蝥米炒法炮制技术及斑蝥药材、生斑蝥和米炒斑蝥饮片质量标准进行规范化研究。建立斑蝥素、总斑蝥素含量测定方法,比较斑蝥不同炮制品中斑蝥素和总斑蝥素含量变化,优选米炒斑蝥炮制工艺条件。测定斑蝥药材及饮片中微量元素的含量,推断结合斑蝥素的存在形式。制定斑蝥药材、生斑蝥及米炒斑蝥饮片质量标准,控制斑蝥饮片质量。方法:在查阅古代和现代文献的基础上,撰写文献综述;以大米颜色变化为指标,采用红外测温仪,测定斑蝥在手工炒制、电加热炒药机炒制过程中温度和米颜色变化,确定米炒工艺条件;以HPLC法代替GC法,以斑蝥素含量为指标,优化斑蝥素的提取工艺,建立斑蝥素的HPLC含量测定方法,并进行方法学考察;比较斑蝥药材、生斑蝥、米炒斑蝥、碱制斑蝥及斑蝥头、足、内翅、外翅各部位斑蝥素含量的变化;以总斑蝥素含量为指标,采用正交实验,优化总斑蝥素的提取工艺,建立总斑蝥素含量测定方法;比较斑蝥药材、生斑蝥、米炒斑蝥及斑蝥头、足、内翅、外翅各部位总斑蝥素含量的变化;分别收集斑蝥药材、生斑蝥、米炒斑蝥样品10批次以上,按照“中药质量标准制定指导原则”,分别对斑蝥饮片的名称、炮制方法、性状、鉴别、检查、含量测定、用法用量等项进行研究,建立斑蝥药材、生斑蝥、米炒斑蝥质量标准,提供起草说明;采用石墨炉、火焰、氢化发生-冷原子吸收法,测定各批次斑蝥药材、生斑蝥及米炒斑蝥中铜(Cu)、锰(Mn)、锌(Zn)、铁(Fe)、镁(Mg)、钙(Ca)、钾(K)、铅(Pb)、镉(Cd)、砷(As)、汞(Hg)等无机元素的含量。结果:撰写出综述2篇:《中药米制法炮制历史沿革的研究》;《中药斑蝥炮制工艺及其药理作用的研究进展》。确定米炒斑蝥中试工艺,写出米炒斑蝥标准操作规程,交由浙江中医药大学中药饮片厂生产出9批样品;优选斑蝥素的HPLC含量测定的色谱条件为:ODS色谱柱,流动相:甲醇-水(23:77),流速1.0ml/min,检测波长230nm,柱温:30℃;确定斑蝥素提取工艺为:用三氯甲烷作溶剂,超声处理(功率400W,频率40kHz)2次(30ml,30ml),每次15min;确定总斑蝥素提取工艺为:A1B2C2D1。即:取三氯甲烷和PH=1的盐酸溶液各10ml,超声处理(功率100W,频率40kHz)15min;斑蝥药材中含斑蝥素0.68%(大斑蝥)、0.72%(小斑蝥),含总斑蝥素1.98%(大斑蝥)、2.34%(小斑蝥);生斑蝥中含斑蝥素0.79%(大斑蝥)、0.74%(小斑蝥),含总斑蝥素2.86%(大斑蝥)、3.55%(小斑蝥);米炒斑蝥中含斑蝥素0.46%(大斑蝥)、0.32%(小斑蝥),含总斑蝥素1.30%(大斑蝥)、1.45%(小斑蝥);碱制斑蝥中含斑蝥素1.98%;斑蝥头足翅中含斑蝥素0.16%,总斑蝥素0.61%,而其重量占全虫的28.2%,从而导致同等重量下斑蝥药材中斑蝥素的含量低于生斑蝥;对收集的斑蝥药材、生斑蝥、米炒斑蝥样品进行显微、理化、TLC鉴别,测定水分、灰分、酸不溶性灰分、浸出物含量;HPLC法测定斑蝥素含量,规定斑蝥药材含斑蝥素(C10H12O4)不得少于0.50%;生斑蝥含斑蝥素(C10H12O4)不得少于0.65%;米炒斑蝥含斑蝥素(C10H12O4)应不得高于0.65%,含总斑蝥素以斑蝥素(C10H12O4)计不得少于1.0%;测定斑蝥各样品中11种无机元素的含量从高至低依次为:K>Mg>Fe>Ca>Zn>Mn>Cu>Pb>As>Hg>Cd。其中As、Hg、Pb的含量以头足翅最高,米炒斑蝥最低;Cd、K、Zn的含量以生斑蝥最高,头足翅最低;Cu、Mg的含量以米炒斑蝥最高,头足翅最低;Mn的含量以斑蝥药材最高,米炒斑蝥和头足翅约等,最低;Fe的含量以斑蝥药材最高,米炒斑蝥最低;Ca的含量以头足翅最高,生斑蝥最低。结论:本研究制定的米炒斑蝥标准操作规程,由浙江中医药大学中药饮片厂中试生产,证明可行强;建立的斑蝥素HPLC含量测定方法,比2005版药典的GC法准确度高,重复性好;斑蝥米炒炮制后斑蝥素含量减少,为炮制降低毒性提供试验依据;斑蝥头足翅中斑蝥素含量较低,证明为非药用部位;建立的斑蝥药材、生斑蝥、米炒斑蝥饮片质量标准及起草说明,通过河南省药品检验所复核,被《中国药典》2010版一部正文收载,为保证中医临床用药安全有效提供了科学依据,也为企业生产提供了饮片质量规范。斑蝥经米炒炮制后Pb、As、Hg、Cd、Fe致癌元素降低,Cu、Mg、Ca抗癌元素增高;斑蝥头足翅中As、Hg、Pb、Fe等致癌元素的含量比其他部位偏高,而Cu、Mg、Mn、Zn、K等抗癌元素则偏低,说明了传统去头足翅、米炒炮制方法具有科学性。本研究证明斑蝥中不仅含有0.35%以上的氯仿浸提的游离斑蝥素,还含有1%以上的结合状态的斑蝥素;本研究首次建立总斑蝥素含量测定方法可用于测定和控制斑蝥总斑蝥素含量;总斑蝥素含量与无机元素含量进行相关性比较,提示斑蝥体内结合斑蝥素可能以斑蝥酸镁、斑蝥酸钾及少量斑蝥酸锌存在,为进一步开发利用斑蝥提供了实验依据。