ABA作为一种重要的植物激素和生长调节剂,介导了高等植物在生命周期中对各种外界环境的响应和适应。9-顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶(9-cis-epoxycarotenoi d dioxygenase,NCED)催化的氧化裂解反应是高等植物ABA生物合成的关键步骤之一,对ABA的合成调控起着重要作用。研究柠条锦鸡儿NCED1基因的启动子并对基因编码蛋白进行初步分析,为研究基因的功能,从而为探索牧草抗逆基因的抗逆调控机制提供依据和参考。本研究利用染色体步移技术,克隆柠条锦鸡儿CkNCED1基因上游启动子序列。经顺式元件预测分析,该序列除基本的启动元件之外,还含有2个脱落酸诱导响应元件ABRE、此外还含有多个逆境相关的元件。将CkNCEDl基因启动子区分别连接到pGWB533和PBI121植物表达载体上,将构建的Promoter::GUS融合载体转入野生型拟南芥中,GUS组织化学染色结果表明,CkNCED1基因在植物的叶、根、茎、花和角果的维管组织中均有表达,且在叶片中表达强度最高。以上研究确定了柠条锦鸡儿NCED1基因的表达部位和强度,进一步阐明该基因在植物ABA相关抗逆胁迫反应中的作用。为进一步研究基因的功能,本文对CkNCED1蛋白的亚细胞定位和原核表达进行分析。通过构建CkNCED1基因与绿色荧光蛋白基因融合的植物表达载体pCAMBIA1302-NC ED1-GFP,利用拟南芥原生质体转化方法进行瞬时表达,研究柠条锦鸡儿NCED1基因编码蛋白的亚细胞定位,结果表明:CkNCED1基因编码蛋白定位于质体中。通过原核蛋白重组技术,进行NCED1蛋白原核表达分析。经聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western Blot分析表明,获得高纯度的融合蛋白,且蛋白具有免疫原性,为研究蛋白功能奠定基础。