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目的:通过检测在糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)-布地奈德作用下,糖皮质激素受体-α(Glucocorticoid Receptor-α, GR-α)、黏蛋白-1(mucin-1,muc1)、天然免疫因子Toll样受体2(Toll-like receptors, TLR2)、Toll样受体4(Toll-like receptors,TLR4)、 Toll样受体5(Toll-like receptors, TLR5)和 Toll样受体7(Toll-like receptors, TLR7)在慢性鼻窦炎伴鼻息肉中的表达情况,探讨糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)-布地奈德对鼻息肉上皮细胞中糖皮质激素受体-α(Glucocorticoid Receptor-α, GR-α)、黏蛋白-1(mucin-1,muc1)及天然免疫因子Toll样受体(Toll-like receptors, TLR)表达的影响,进一步深入研究慢性鼻窦炎伴鼻息肉的糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)-布地奈德抵抗机制。 方法:将手术中取下的10份新鲜鼻息肉标本采用0.1%胶原酶Ⅳ消化法进行上皮细胞原代培养及纯化,用相差倒置显微镜对鼻息肉上皮细胞进行形态学鉴定;并用鼠抗人细胞角蛋白-19细胞免疫组化染色法对鼻息肉上皮细胞进行鉴定。依据糖皮质激素-布地奈德(1×10-8 mol/L)作用时间不同,实验组分为0小时、6小时、12小时、24小时和48小时。蛋白印迹法(Western blot)分别检测GRa、MUC1在慢性鼻窦炎伴鼻息肉中糖皮质激素-布地奈德(1×10-8 mol/L)作用下表达情况;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测TLR2、TLR4、TLR5、TLR7在慢性鼻窦炎伴鼻息肉中糖皮质激素-布地奈德(1×10-8 mol/L)作用下表达情况。 结果:(1)布地奈德(1×10-8 mol/L)作用下0 h组、6 h组、12 h组、24 h组和48 h组鼻息肉上皮细胞 GR-α蛋白表达水平分别为(0.818±0.693)、(1.312±0.117)、(0.783±0.050)、(0.725±0.122)和(0.709±0.142),MUC1蛋白表达水平分别为(1.455±0.165)、(1.839±0.069)、(1.021±0.182)、(0.883±0.206)和(0.701±0.076)。GR-α蛋白表达水平0 h组<6 h组(P<0.05),6 h组>12 h组(P<0.05),12 h组GR-α蛋白表达水平与24h、48h组相比,差别无明显统计学意义(P﹥0.05);MUC1蛋白表达水平0 h组<6 h组(P<0.05),6 h组>12 h组(P<0.05),12 h组MUC1蛋白表达水平与24h、48h组相比,差别无明显统计学意义(P﹥0.05)。(2)0 h组、6 h组、12 h组、24 h组和48 h组鼻息肉上皮细胞TLR2 mRNA表达水平分别为(3.840±0.341)、(3.015±0.358)、(2.754±0.282)、(5.075±0.392)和(6.083±0.363),TLR4 mRNA表达水平分别为(0.544±0.025)、(0.651±0.031)、(0.407±0.024)、(0.777±0.036)和(0.595±0.033), TLR5 mRNA表达水平分别为(2.191±0.346)、(1.690±0.169)、(2.551±0.282)、(3.049±0.278)和(1.530±0.226),TLR7 mRNA表达水平分别为(1.680±0.119)、(1.556±0.105)、(1.408±0.107)、(1.907±0.145)和(1.094±0.101)。TLR2 mRNA表达水平0 h组>6 h组(P<0.05);6 h组TLR2 mRNA表达水平与12h组相比,差别无明显统计学意义(P﹥0.05);12 h组<24 h组<48组(P<0.05)。TLR4 mRNA表达水平0 h组<6 h组(P<0.05);6 h组>12h组(P<0.05);12 h组<24 h组(P<0.05);24 h组>48 h组(P<0.05)。TLR5 mRNA表达水平0 h组﹥6 h组(P<0.05);6 h组<12 h组<24 h组(P<0.05);24 h组﹥48 h组(P<0.05)。TLR7 mRNA表达水平12 h组﹥24 h组(P<0.05);0 h组TLR7 mRNA表达水平与6 h组相比,差别无明显统计学意义(P﹥0.05),6h组TLR7 mRNA表达水平与12 h组相比,差别无明显统计学意义(P﹥0.05)。 结论:(1)浓度为1×10-8 mol/L的糖皮质激素-布地奈德在6h显著上调鼻息肉上皮细胞中GR-α和MUC1蛋白的表达,随时间不断延长,GR-α和MUC1蛋白表达量逐渐下降,在12h时达到最低值。(2)浓度为1×10-8 mol/L的糖皮质激素-布地奈德在6h下调鼻息肉上皮细胞中Toll样受体(TLR2,5)mRNA的表达,但是随着时间不断延长,Toll样受体(TLR2,5)mRNA表达量逐渐上升;对于TLR4的表达有两个转折点,即在6h和24h分别上调TLR4mRNA的表达;在24h开始上调TLR7mRNA的表达。(3)在浓度为1×10-8 mol/L的糖皮质激素-布地奈德的作用下,GR-α、MUC1、TLR2、TLR4、TLR5、TLR7在慢性鼻窦炎伴鼻息肉中的表达差异,提示GRa、MUC1及Toll样受体在慢性鼻窦炎伴鼻息肉的糖皮质激素抵抗机制发挥一定的作用。