二氢槲皮素属于二氢黄酮醇类化合物,主要植物来源为松科落叶松属落叶松、金缕梅科蚊母树等。二氢槲皮素具有许多重要的生物学活性。能够抑制和激活多种酶,具有降血压、扩张冠状动脉、清除低密度脂蛋白的作用,对糖尿病、心脏病具有一定的治疗作用,能够抑制高糖诱导的心肌细胞的凋亡。本课题组通过前期的研究发现,二氢槲皮素对异丙肾上腺素导致的大鼠心肌缺血具有很好的保护作用,为进一步在细胞水平上探究其抗心肌缺血的作用机制提供了理论依据。本实验建立了 H2O2诱导H9c2心肌细胞的氧化损伤模型,进一步在细胞水平上探讨了二氢槲皮素对心肌细胞损伤的保护作用及作用机制。利用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法考察预孵育二氢槲皮素对H2O2诱导H9c2心肌细胞损伤细胞存活率的影响;利用试剂盒检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH),细胞内丙二醛(MDA),过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量的变化。结果表明:不同浓度的二氢槲皮素预处理4、12、24 h均能够提高细胞的存活率,且呈剂量依赖性,其中预处理12h的保护作用最为明显。与空白组相比,模型组细胞的存活率下降,LDH的漏出量增大,细胞内MDA的含量增大,CAT、SOD、GSH-Px的活力明显降低。用二氢槲皮素预处理12 h能显著地减少LDH的漏出量,降低细胞内MDA的含量,提升细胞内CAT、SOD、GSH-Px的活力。由此可见,二氢槲皮素对H2O2诱导H9c2心肌细胞损伤具有显著地保护作用,且呈剂量依赖性,其作用机制可能与其能够提高细胞内抗氧化酶活性,增强细胞稳定性有关。二氢槲皮素含有较多的酚羟基,具有抗氧化、抗辐射作用。在治疗浓度甚至高于治疗浓度下对人体细胞和组织均无毒副作用,在工业上二氢槲皮素常用做食品添加剂。此外,它还具有抗病毒和抗肿瘤活性。但因其水溶性小,生物利用度低,口服吸收不理想,故很大程度上限制了其应用。本实验基于前期药效学及提取、精制、制备、成型工艺的研究基础上,即选用PVP-k30为载体,二氢槲皮素/pvpk30(1:6),采用全粉末直接压片法制备SD片。并对二氢槲皮素及SD片在大鼠体内的药代动力学特征进行了初步研究,为二氢槲皮素的进一步开发奠定基础。药代动力学的研究采用SD雄性大鼠为实验动物,血浆样品经乙酸乙酯萃取后,上清液经氮气吹干,甲醇复溶后注入电喷雾串联质谱(LC-MS/MS),在负离子多反映监测模式(MRM)下对大鼠血浆中二氢槲皮素进行检测。利用DAS软件拟合并计算其药代动力学参数。二氢槲皮素从分子量为304.0裂变为285.0,内标(对羟基苯甲酸丁酯)从分子量为193.1裂变为92.0。二氢槲皮素及其SD片灌胃给药后的二氢槲皮素血药浓度在5～4280 ng/mL范围内呈线性,提取回收率和相对回收率均大于75%,日内、日间精密度均小于8%,符合生物样品分析要求。以二氢槲皮素计,低中高(15、30、60mg/kg)三剂量灌胃给药的实验结果表明:二氢槲皮素血药曲线下面积(AUC)分别为1461.3±265.1(ng/mL min)、13362.3±4761.3(ng/mLmin)、45464.8±19532.4(ng/mL min);SD 片中二氢槲皮素血药曲线下面积(AUC)分别为的2186.5±302.6(ng/mL min)、16836.5±3256.2(ng/mLmin)、52739.2±11038.7(ng/mLmin);最大血药浓度分别为 89.9±26.2(ng/mL)、820.6±102.9(ng/mL)、2275.4士288.0(ng/mL);132.5±18.6(ng/mL)、955.6±174.4(ng/mL)、2842.9±631.4(ng/mL);单剂量(15mg/kg)注射二氢槲皮素给药血药曲线下面积(AUC)为673514.8±76357.3(ng/mL min),从而计算出二氢槲皮素及其SD片绝对生物利用度分别为0.165%,0.296%。达峰时间分别为 7.8±0.3min,8.3±1.5min,13.5±1.9min;8.9±0.5min,9.8±1.6min,15.2±2.8min。该实验结果表明:二氢槲皮素SD片吸收迅速,起效快,血药浓度高。