卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌是女性生殖系统中常见的三大恶性肿瘤,虽然卵巢癌的发病率是最低的,50岁以上女性卵巢癌的患病率为1/2500,但其恶性程度及致死率却是最高的[1],同时卵巢癌也是最具侵袭性的恶性肿瘤之一。全球每年新诊断卵巢癌患者约24万例,死亡15万例,中国大陆2015年新诊断卵巢癌患者5.2万例,死亡2.3万例。卵巢癌致死率高的原因之一是缺乏有效的早期诊断指标,疾病发现时多已为中晚期,70%-75%的患者被确诊时已属于Ⅲ期或Ⅳ期[2],出现远处转移症状,如腹水、恶病质、肠梗阻等。目前治疗卵巢癌患者的方法是在肿瘤细胞减灭术后联合多疗程的化疗,虽然通过这种联合治疗能够提高晚期卵巢癌患者尤其是年轻患者的生活质量,但结局依旧不容乐观,5年生存率仍徘徊在30%左右[3]。卵巢恶性肿瘤分为上皮性肿瘤、性索-间质肿瘤及生殖细胞肿瘤三大类,其中上皮性卵巢癌患者占卵巢恶性肿瘤总数的75%-90%[4]。目前国内外有关卵巢癌的研究众多,然而其发病机制尚未清楚。所以,探索上皮性卵巢癌的发生发展机制,研究特异敏感的血清或其它组织标志物及有效的治疗靶点,仍然是目前国内外卵巢癌研究领域最重要的目标。寻找新的生物标志物以提高早期卵巢癌诊断及预后的特异性及敏感性已刻不容缓。研究相关肿瘤标志物,不仅可为卵巢癌的预防提供一定的指导,也可为疾病发生后的靶向治疗提供一定的方向。FOXO3a是一种重要的转录因子,且被确定是重要的抑癌基因,广泛存在于人体组织中并发挥着众多重要的生理功能。国内外最新研究发现[5-7],FOXO3a在胃癌、肝癌、口腔鳞癌、乳腺癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤中表达下降,且其表达水平只与肿瘤的组织学分级相关。此外,FOXO3a存在于PI3K/AKT信号转导通路中,此通路与肿瘤细胞的增殖分化及凋亡有关,是迄今公认的最重要的通路之一[8]。其中,信号通路中的AKT是第一个被证实对FOXO3a具有磷酸化作用的癌激酶[9]。当细胞受到外界过量营养因子等作用时,AKT磷酸化为p-AKT,从胞质进入胞核,与FOXO3a转录因子结合,FOXO3a转录因子被磷酸化后减弱了与DNA的结合作用,而与14-3-3蛋白的结合增强,从胞核转运至胞质,被蛋白酶水解,从而失去活性[10]。FOXO3a的下游靶基因众多[11-15],Bim是其中之一,属于Bcl-2家族成员,有促使细胞凋亡的作用。有研究发现,FOXO3a的功能失活发生在翻译后蛋白修饰水平,但在卵巢癌中的研究甚少。因此,作者对p-AKT、FOXO3a、Bim在上皮性卵巢癌组织中的表达水平及三者的相关关系进行了实验研究,望能为上皮性卵巢癌患者的靶向治疗和评估预后提供新的思路方向和理论支持。目的检测正常、良性、恶性卵巢上皮组织中p-AKT、FOXO3a和Bim在mRNA和蛋白水平的表达情况,分析三者在蛋白表达水平的相关性,并重点探讨FOXO3a作为抑癌基因对卵巢癌的治疗及预后所具有的重要价值。研究对象和实验方法1.研究对象:收集正常卵巢上皮组织25例,来源于因良性宫体疾病行卵巢切除患者;良性卵巢上皮组织21例,来源于因良性卵巢肿瘤行附件切除患者;上皮性卵巢癌组织43例;术前均未行放化疗等辅助治疗。所有病例均经手术和病理证实。经过伦理委员会批准及受试者同意后进行收集。2.研究方法:对上述89例卵巢上皮组织采用荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测FOXO3a、Bim mRNA的表达,采用免疫组织化学SP法检测p-AKT、FOXO3a、Bim蛋白的表达。3.统计学方法:采用SPSS21.0软件进行数据处理。非正态分布定量资料mRNA相对表达量用M(P25~P75)表示,组间比较采用秩和检验;定性资料的比较用χ2检验;相关性分析采用Spearman法。检验水准α=0.05。组间两两比较时检验水准α′=α/3=0.0167。结果1.3种组织中FOXO3a、Bim mRNA的表达比较FOXO3a mRNA在正常组、良性组、恶性组中的相对表达量分别为0.753(0.350,1.500)、0.563(0.450,1.875)、0.883(0.438,1.938),组间比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。Bim mRNA在正常组、良性组、恶性组中的相对表达量分别为1.585(0.625,2.500)、0.285(0.236,2.376)、0.060(0.029,0.413),组间比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。2.3种组织中p-AKT、FOXO3a和Bim蛋白的表达比较p-AKT蛋白在正常组中低表达,在恶性组中高表达,组间比较差异均有统计学意义(P均<0.0167);FOXO3a、Bim蛋白在正常组中高表达,在恶性组中低表达,组间比较差异均有统计学意义(P均<0.0167)。3.上皮性卵巢癌中p-AKT、FOXO3a和Bim蛋白的表达与临床病理特征的关系p-AKT、FOXO3a和Bim蛋白的表达与上皮性卵巢癌的组织学分级有关(P<0.05),而与患者年龄、临床分期、组织类型、淋巴结转移无关(P均>0.05)。4.p-AKT、FOXO3a和Bim蛋白在上皮性卵巢癌中表达的相关性分析经Spearman法检验,在上皮性卵巢癌组织中,FOXO3a与p-AKT在蛋白表达水平呈负相关(r=-0.584,P<0.05),FOXO3a与Bim在蛋白表达水平呈正相关(r=0.437,P<0.05)。结论1.FOXO3a可能参与上皮性卵巢癌的发生及发展过程,且功能失活可能发生在翻译后蛋白修饰水平。Bim可能参与上皮性卵巢癌的发生及发展过程,且功能失活可能发生在转录水平。2.p-AKT蛋白的高表达参与了上皮性卵巢癌的发生发展。3.p-AKT蛋白、FOXO3a蛋白及Bim蛋白与上皮性卵巢癌细胞分化程度有关,也许可作为预测肿瘤细胞分化程度的指标。4.在上皮性卵巢癌组织中,p-AKT蛋白和FOXO3a蛋白的表达呈负相关,FOXO3a蛋白和Bim蛋白的表达呈正相关,提示这三者可能通过某种机制共同参与上皮性卵巢癌的发生发展过程。