【摘 要】
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绵羊基因表达谱显示,KRT2基因在不同毛色绵羊皮肤的mRNA表达有差异,暗示KRT2可能对皮肤黑色素的形成有关。为探索KRT2对羊驼皮肤黑色素细胞黑色素生成的影响,首先采用免疫组
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绵羊基因表达谱显示,KRT2基因在不同毛色绵羊皮肤的mRNA表达有差异,暗示KRT2可能对皮肤黑色素的形成有关。为探索KRT2对羊驼皮肤黑色素细胞黑色素生成的影响,首先采用免疫组织化学(IHC)实验,发现KRT2基因在毛囊根鞘和毛球中表达,且棕色羊驼皮肤中KRT2基因的表达量高于白色羊驼皮肤。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹(WB)实验揭示,在棕色羊驼皮肤中KRT2基因对mRNA和蛋白质的表达量比白色羊驼皮肤高,且有极显著差异(P<0.01)。此外,通过体外培养羊驼黑色素细胞,采用细胞转染技术,通过构建过表达载体处理羊驼皮肤黑色素细胞72h后,测量羊驼皮肤黑色素细胞中小眼畸形相关转录因子(Mitf)、酪氨酸酶(Tyr)、酪氛酸相关蛋白-1(Tyrp-1)基因的mRNA和蛋白质的相对表达量,与对照组比较,3个基因的mRNA及蛋白水平的表达明显上调,且差异极显著(P<0.01)。分光光度法测量A490结果证明,pmirGLO-KRT2过表达处理的羊驼皮肤黑色素细胞产生的黑色素含量分别是pmirGLO-NC细胞组与空白细胞对照组的1.45倍(P<0.01)和1.36倍(P<0.01),而pmirGLO-NC细胞组与空白细胞对照组无明显差异。所有数据表明,KRT2基因可通过刺激羊驼皮肤黑色素细胞黑色素合成相关信号通路,促进黑色素的合成,从而调控毛色的形成,为进一步探索黑色素的生成提供了必要的理论基础。
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