研究背景及目的： 前列腺癌是男性最常见的恶性肿瘤之一，死亡率高居男性癌性死亡的第二位，近年来有迅速上升的趋势。目前，前列腺癌的生物诊断和生物治疗是最有希望尽早诊断和提高疗效的手段，而肿瘤特异标志物是实现生物诊断和生物治疗的基础。前列腺特异性膜抗原(PSMA)是一种细胞跨膜糖蛋白，其表达于正常前列腺、前列腺增生、前列腺癌组织中，并且在前列腺癌中表达明显增高。PSMA定位于细胞膜及在前列腺癌组织的高特异性表达，使其作为特异的膜标志物及诊断治疗的潜在靶点已受到广泛关注。 前期研究中已经发现并证实PSM—E是PSMA的一种新型剪接变异体，其基因序列与PSMA及其它变异体不同；PSM—E基因编码的蛋白是一种新的细胞跨膜蛋白。而且PSM—E比PSMA具有更高的前列腺组织特异性，PSM—E高表达于前列腺癌组织，并与前列腺癌恶性程度呈正相关，比PSMA具有更高的肿瘤特异性。所以PSM—E可有望成为前列腺癌新的诊断和治疗靶点。 本研究目的构建高效稳定表达PSMA和PSM—E蛋白的细胞株并进一步验证PSMA及PSM—E对前列腺癌细胞的生物学行为影响，比较二者有无差异，为PSMA及其剪接变异体在前列腺癌的发生发展机制中的作用研究提供新的方向。 材料及方法： 1、本研究在实验室前期工作基础上，以本实验室保存的真核表达载体pcDNA3.0/PSMA和pcDNA3.0/PSM—E质粒为模板，经双酶切获得分别包含PSMA和PSM—E的完整开放读码框架的目的基因片段，构建两个病毒表达载体PSMA/pLXRN和PSM—E/pLXRN，经双酶切和测序鉴定。 2、将鉴定阳性的PSMA/pLXRN和PSM—E/pLXRN以及pLXRN分别与pVSV—G共转染病毒包装细胞GP2-293，获得重组的逆转录病毒，收集病毒上清液感染人前列腺癌细胞PC—3。G418筛选感染后的细胞，RT—PCR、间接免疫荧光和Western—blot分别从基因水平和蛋白水平鉴定G418抗性细胞中目的蛋白表达。 3、利用PSMA和PSM—E蛋白稳定表达阳性的PC—3细胞进行体外功能实验，包括绘制生长曲线和侵袭实验，比较PC—3、pLXRN—PC3、PSMA/pLXRN—PC3和PSM—E/pLXRN—PC3细胞的生物学行为有无差异。 结果： 1、测序表明序列与模板100％同源，说明PSMA/pLXRN和PSM—E/pLXRN病毒表达载体构建成功。 2、筛选出的G418抗性细胞克隆扩增后，RT—PCR，间接免疫荧光和western—blot证实PSMA和PSM—E在人前列腺癌细胞系PC—3细胞成功表达。 3、各组功能实验均以空质粒组和PC—3细胞组为对照组，PSMA/pLXRN—PC3和PSM—E/pLXRN—PC3与pLXRN—PC—3组比较有生长减慢的趋势(P值分别为0.002和0.033)；侵袭实验中显示PSMA/pLXRN—PC3组与空质粒对照组和PSM—E/pLXRN—PC3组比较，侵袭能力减弱(P值分别为0.014和0.003)，PSM—E/pLXRN—PC3组的侵袭能力与空质粒组比较差异无统计学意义。 结论： 1、成功构建了PSMA/pLXRN和PSM—E/pLXRN两个病毒表达载体，获得PSMA/pLXRN—PC3和PSM—E/pLXRN—PC3稳定表达细胞株。 2、证实PSMA可抑制前列腺癌细胞PC—3的侵袭，PSM—E侵袭抑制功能弱于PSMA。