论文部分内容阅读
海洋生物资源是天然药物的重要来源，其中热带珊瑚礁生态系统具有丰富的生物多样性和化学多样性，尤其是珊瑚共附生微生物，产生的化学防御物质往往具有良好的药理活性，为药物先导化合物的发现提供了重要资源，引起了天然产物化学、药理学等领域的广泛关注。本论文以23株中国徐闻普哥滨珊瑚共附生真菌为研究对象，筛选出5株活性菌株，通过产物HPLC丰富度分析确定对菌株Fusarium fujikuroi XWC21-13大规模发酵，分离、鉴定次级代谢产物，并对化合物的生物活性及菌株发酵条件进行初步研究。通过硅胶柱层析、反相硅胶柱层析、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱层析和高效液相色谱等分离手段从分离自中国徐闻普哥滨珊瑚的一株共附生真菌Fusariumfujikuroi XWC21-13发酵液中分离得到4个化合物。通过解析波谱(UV, NMR, MS)数据，化合物1鉴定为大环内酯类化合物(S)-curvularin，化合物2-4仍在鉴定中。运用抗肿瘤、抗菌活性模型对化合物1、2进行活性评价。化合物1有一定的抑制水产腐败菌活性，对希瓦氏菌Shewanella sp. SL3和副溶血性弧菌Vibrio parahemolyticus的MIC值均为50μM。此外，化合物1对人宫颈癌Hela细胞具有较强的抑制活性，其IC50为26.70μM；化合物2对人宫颈癌Hela细胞及人大细胞肺癌H460细胞有抑制活性，其IC50分别为55.78μM和62.16μM。运用HPLC定量分析监测代谢产物(S)-curvularin在不同发酵条件下的产量变化情况，最终确定Fusarium fujikuroi XWC21-13最适发酵方式为静置发酵；发酵过程添加500μM SAHA，温度28℃，静置发酵29天，可以使(S)-curvularin的产量达到381.4039μg/mL，产量提高40.86%。添加500μM SAHA的摇床培养（60rpm）不能明显提高(S)-curvularin产量，但相对静置发酵可以缩短近50%发酵周期。本文对一株珊瑚共附生真菌进行次级代谢产物分离及活性研究，得到2个活性化合物，对水产腐败菌及Hela细胞显示中等活性，同时通过微生物发酵技术提高产量，证明添加SAHA是促进大环内酯类化合物合成的有效策略，为海洋微生物资源有效利用提供了科学依据。