大豆和水稻中转基因成分的快速检测技术开发

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转基因技术的发展给人们的生活带来了更多的机遇。通过生物技术可使品种改良如产量增加、品质提高、抗性增强,包括抗虫、抗旱、抗病、抗逆等,但200多年来的工业文明告诉人类,科学是一把双刃剑,在给人类带来无限益处的同时,也引起了人们的担忧。从转基因技术诞生至今,人类一直进行着有关转基因技术的食品安全、环境风险、生态安全、社会伦理道德以及国际经济和政治安全等一系列问题的思考及争论。因此,转基因植物的检测的愈发重要,只有准确地检测转基因农作物,才能有效的对上市的转基因食品进行监控。并且在进出口贸易中,检测转基因农作物也是重要的一个环节。其中RRS转基因大豆和BT63转基因大米的检测是最近的研究热点。本论文建立了用环介导等温核酸扩增法检测转基因农作物的方法,与蛋白检测、普通PCR、荧光PCR这些传统检测转基因农作物的方法相比,具有灵敏度高、特异性高,操作简便、快速,以及成本较低廉等特点。首先,通过对多种转基因成分的序列结构进行分析,比较突变频率、片段保守性分析等,然后用计算机模拟筛选对设计出的引物进行末端能量状态分析、二级结构分析、相互作用分析、特异性筛选。设计出的引物能达到:高覆盖度,即能扩增所有靶标片段;高特异性,即对其它作物和生物基因不会有扩增而造成可能的假阳性。其次,采用QPCR的标准方法对比三种不同的核酸提取方法,综合性能和价格选择出可应用于检测实践的试剂盒,以进行下一步的实验操作。最后以环介导等温扩增法比照QPCR的标准方法,进行特异性和灵敏度实验,筛选得到了对2个内源基因,4个外源基因检测的环介导等温扩增法引物。这套提取方法结合反应与产物检测体系的检测流程,整体特异性和灵敏度都达到了欧盟检测的标准,为下一步制订行业或国家标准奠定了重要的基础。
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