【摘 要】
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目的:探讨Drp1介导的线粒体分裂在低氧诱导胶质母细胞瘤细胞迁移中的作用及其机制。方法:本实验选用了人胶质母细胞瘤细胞系(U251),实验采用三气培养箱(37℃,1%O2,5%CO2,和94
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目的:探讨Drp1介导的线粒体分裂在低氧诱导胶质母细胞瘤细胞迁移中的作用及其机制。方法:本实验选用了人胶质母细胞瘤细胞系(U251),实验采用三气培养箱(37℃,1%O2,5%CO2,和94%N2)来模拟肿瘤细胞所处的低氧微环境。为改变细胞内Drp1活性分别进行了si RNA干扰敲低U251细胞Drp1的表达、Drp1抑制剂Mdivi-1预处理、过表达GFP-Drp1或显性失活的GFP-Drp1-K38A。为观察各实验组细胞内线粒体形态变化,首先将Mito-Ds Red质粒转染细胞以荧光标记线粒体,并在荧光显微镜下观察细胞内线粒体形态改变。在检测U251细胞迁移能力时分别用了划痕实验和Transwell两种实验方法。细胞内ROS通过DCFH-DA荧光探针标记并利用流式细胞仪定量检测各实验组U251细胞中的ROS水平。通过Western Blot检测IκBα磷酸化修饰水平和N-cadherin蛋白表达水平以分别反映各实验条件下NF-k B信号通路的激活和EMT转变状况。结果:线粒体形态观察实验结果显示,低氧条件下线粒体分裂明显增加;利用Drp1抑制剂Mdivi-1、敲低Drp1表达水平或表达显性失活Drp1-K38A均能有效抑制低氧条件下线粒体的分裂。划痕和Transwell实验结果显示,低氧诱导胶质母细胞瘤细胞迁移加快;Drp1 si RNA干扰或加入Mdivi-1均能有效抑制低氧诱导的细胞迁移加快。ROS的含量检测显示,低氧条件下ROS水平较对照组显著升高;敲低Drp1表达水平或加入Mdivi-1均能有效抑制低氧条件下ROS水平升高。Western Blot实验结果显示,低氧条件下IκBα磷酸化修饰水平和N-cadherin蛋白表达水平显著升高,激活NF-k B信号通路、EMT发生转变;利用Mdivi-1、Drp1 si RNA干扰、Drp1-K38A均能抑制低氧条件下IκBα磷酸化修饰和N-cadherin蛋白表达水平升高,抑制NF-k B信号通路激活、EMT转变。结论:Drp1介导的线粒体分裂主要通过促进线粒体途径ROS的产生,并激活NF-κB通路和EMT转变,从而增强低氧条件下胶质母细胞瘤细胞的迁移能力,这可能为抑制胶质母细胞瘤强迁移侵袭能力提供新的治疗靶点。
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