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目的：建立流式细胞术胞内细胞因子(cytokine flow cytometry,CFC)检测法,检测结核病组、潜伏结核感染(latent tuberculosis infection,LTBI)组、非结核病组三组分泌r-干扰素(IFN-γ)的结核杆菌特异性CD4+T淋巴细胞比例。计算各组敏感性及特异性并进行比较；同时将CFC检测法结果与结核菌素试验(即PPD皮试)、结核抗体结果进行对比分析,从而探讨流式细胞术胞内细胞因子检测法检测结核杆菌特异性T细胞—IFN-γ对儿童结核病及潜伏结核感染的诊断价值。方法：连续收集2008年01月～2010年01月苏州大学附属儿童医院门诊及住院部0-14岁疑似结核病患儿86例；潜伏结核感染患儿75例,健康对照组20例。所有入选对象均已接种BCG,并记录详细的临床资料。综合临床资料及相关检查,最终诊断为结核病者41例,其中肺结核病17例,肺外结核病24例；非结核病者45例；潜伏结核感染者75例,进行以下分组：A组：结核病组,41例；A1组：肺结核病组,17例；A2组：肺外结核病组,24例；B组：潜伏结核感染组(LTBI),75例；C组：非结核病组,45例；D组：健康对照组,20例。根据结核杆菌特异的效应T淋巴细胞在特异抗原的刺激下分泌γ-干扰素,检测IFN-γ可以确定体内是否存在对结核杆菌反应的效应T淋巴细胞的原理,结合流式细胞仪(flow cytomeytry,FCM)、胞内细胞因子(intracellular cytokine,ICK)染色法建立流式细胞术胞内细胞因子检测法检测结核菌感染的方法。每组研究对象均进行PPD试验、结核抗体检测以及流式细胞术胞内因子检测(以下简称CFC检测法)并进行全面的临床评估,随访3～6个月。CFC检测法简要步骤：肝素钠抗凝真空管采集入选患儿外周血1ml,取三只流式测定管：①阳性对照管：加入0.2ml肝素钠抗凝全血,加入佛波酯(PMA20ng／ml)、离子酶素(IN01μg／ml)共刺激,加入10μl 0.5mg／mlBrefeldin(BFA)：②刺激管：加入0.2ml肝素钠抗凝全血,加入结核杆菌特异性抗原(ESAT-6+CFP-10各50μl)刺激,加入10μl 0.5mg／ml BFA阻断剂；③未刺激管：加入0.2ml肝素钠抗凝全血,加入10μl 0.5mg／ml BFA阻断剂；5% CO2、37℃,阳性刺激管温箱培养6小时,抗原多肽刺激管培养24小时(温箱,松盖)。然后每管均加入固定剂、破膜剂,并加入荧光标记抗体,上流式细胞仪检测结核杆菌特异性T细胞—IFN-r分泌情况。计算流式检测结果的灵敏度及特异度。并与PPD试验、结核抗体检测结果进行对比分析。结果：1、结核病组及潜伏结核感染组分泌IFN-γ的结核杆菌特异性CD4+T细胞比例均高于健康对照组及非结核感染组(P<0.05)；而结核病组与潜伏结核感染组相比较,非结核感染组与健康对照组相比较,分泌IFN-γ的结核杆菌特异性CD4+T细胞均无明显差异(P>0.05)；2、用CFC法检测,41例结核病患儿90.24%阳性(37／41),9.76%阴性(4／41)；潜伏结核感染患儿85.33%阳性(64／75),14.67%阴性(11／75),结核病组与潜伏结核感染组相比,CFC检测法阳性率无明显差异(P>0.05)；而非结核感染组患儿100%阴性(45／45),阳性率为0；故结核病组及潜伏结核感染组CFC检测法阳性率均高于非结核病组(P<0.05)；健康对照组1例阳性,说明该法特异性为95%(19／20)。3、潜伏结核感染组CFC检测法阳性率为85.33%,与PPD皮试有较好的一致性(85.33%)；而结核抗体检测阳性率为28%,两者相比较,差异有显著统计学意义(P<0.01)。非结核病组PPD假阳性率为40%(18／45),而CFC法假阳性率为0,即对该组来讲,PPD皮试特异性为60%,CFC法特异性为100%,二者比较,差异有统计学意义(P<0.05)。4、结核病组CFC检测法阳性率为90.24%,结核抗体检测阳性率为56.10%,二者相比较,差异有统计学意义(P<0.05)；PPD皮试阳性率为70.73%,二者相比差异有统计学意义(P<0.05)；肺结核病组CFC检测法阳性率为94.12%,肺外结核组为87.5%,二者比较,无明显差异(P>0.05)。结论：1、结核杆菌特异性T细胞—IFN-γ流式检测法敏感性强；且由于ESAT-6、CDP-10两种特异性抗原的应用,特异度高。2、对于潜伏结核感染患儿,结核杆菌特异性T细胞—IFN-γ流式检测法可区分BCG接种反应,故适合我国儿童普遍接种BCG的国情；且所需时间短,一般24小时即可出结果,可避免主观因素对结果的影响,可以快速、准确诊断儿童潜伏结核感染；3、对于结核病患儿,结核杆菌特异性T细胞—IFN-γ流式检测法的敏感性、特异性与PPD皮试、结核抗体检测相比,均高于后者,差异有统计学意义,故该法同样可作为儿童结核病诊断的重要辅助手段。