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共轭亚油酸(Conjugated linoleic acid,CLA)是一系列具有共轭双键的十八碳二烯酸。作为一种新型的具有广泛生物活性的功能性脂肪酸而备受关注。目前,CLA的规模化生产主要利用化学合成法,但是副产物较多,不易纯化。而利用生物合成法制备CLA,条件温和,产物安全单一,因此是制备CLA的一种有效途径。本文将混菌培养与完整细胞法两种技术相结合,利用混菌完整细胞生物合成CLA,既明显提高了菌体的产酶能力,又避免了 LA对菌体抑制作用,显著提高了 LA转化为CLA的转化率。本文通过GC-MS法确定了混菌完整细胞生物合成CLA的主要是c9,tll-CLA,t10,c12-CLA以及t,t-CLA的混合物,并选择UV法作为定量检测方法。本文选用7种不同的乳酸菌为试验菌株,分别对单菌与混菌的完整细胞生物合成CLA的能力进行比较,发现嗜酸乳杆菌与植物乳杆菌的完整细胞共同合成CLA的能力最高,并确定当二者的体积比为1:1时,CLA合成量最高,之后分别对其完整细胞生物合成CLA的营养、诱导培养、透性化处理与反应条件进行了研究。通过单因素与正交试验确定营养条件为:葡萄糖20 g/L、蛋白胨15 g/L、牛肉膏5 g/L、酵母膏5g/L、无水乙酸钠7.5g/L、吐温-80 1.5g/L、柠檬酸二铵3g/L、K2HPO43.93 g/L、MgS04 0.58 g/L、MnS04 0.3 g/L,CLA的合成量为 81.4 μg/mL。通过单因素与正交试验确定诱导培养条件为:LA添加量5%(v/v)、接种量1.5%(v/v)、pH6.0、温度37℃时间间30h、诱导LA加加时间间8h,CLA合成量为145.2μg/mL。透性化处理的适宜条件为:CTAB添加量为2%(m/v),透性化处理温度为30 ℃,透性化处理时间为15 min,CLA合成量为194.8 μg/mL。通过单因素试验与响应面分析确定反应条件为:在Na2HPO4/KH2P04(0.1mol/mL)缓冲体系中,底物LA0.7mg/mL,完整细胞4mg/mL,反应pH6.5、反应温度37.5℃、反应时间16 h、BHT添加量0.4%(v/v),CLA合成量为492.4 μg/mL,转化率70.3%。通过分析发现对比基础条件,营养与透性化处理相对有利于t,t-CLA的形成,诱导培养条件相对有利于t10,c12-CLA的形成,而反应条件则有利于c9,t11-CLA的形成。