授粉诱导金钗石斛花衰老过程中蛋白质的差异表达研究

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金钗石斛是当前国际花卉市场上最重要的花卉之一。授粉后能快速诱导其衰老。本文采用蛋白质组学技术研究了人工授粉后,金钗石斛花瓣衰老过程中蛋白质的差异表达。  1.建立了金钗石斛花瓣蛋白双向电泳体系。对样品制备,IPG胶条的pH值范围等进行了优化。采用酚抽提法提取蛋白;样品与水化液1∶40复溶;被动水化,上样量为1.35 mg,等点聚焦程序B2,选用24 cm pH值3-10 NL胶条和12%的凝胶分离蛋白;采用考马斯亮蓝G-250染色,获得了可识别742个蛋白质斑点的双向电泳图谱,且重复性好、分辨率高。  2.研究了人工授粉后,金钗石斛花瓣在诱导的衰老过程中蛋白质差异表达的变化情况。双向电泳的研究结果表明:发现35个差异表达的蛋白质点,其中上调表达的9个,下调表达的19个,先上调后下调的2个,先下调后上调的3个,都是3倍以上的倍性差异。对35个差异显著蛋白质斑点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱串联质谱分析,共获得35个较好的二级质谱图,通过数据库搜索,其中有33个蛋白质功能得到了鉴定。这些蛋白质主要与物质和能量代谢,应激响应,蛋白质降解,蛋白质合成,信号转导,细胞骨架管理等生物学功能相关。
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