杀虫剂降解菌的筛选和鉴定及按蚊肠道宏基因组的组成研究

来源 :陕西师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhangwahaha
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中华按蚊(Anopheles sinensis)是我国广大平原地区重要的传疟媒介,其主要孳生地为稻田,稻田中杀虫剂的大量使用,在有些地区已加剧和促进了蚊虫抗性水平的发展和提高。笔者通过筛选和鉴定稻田中可降解溴氰菊酯、敌百虫和毒死蜱的菌群,进一步测定其降解效能,为其最终应用至稻田,促进杀虫剂的快速降解提供基础资料。取得的主要结果如下:首先,采用经典的筛选方法获得了稻田水体中可降解溴氰菊酯、敌百虫和毒死蜱的细菌菌群。之后,基于分子特征,鉴定了降解细菌菌群:可降解毒死蜱和敌百虫的细菌中均有假单胞菌属(Pseudomonas)种类,提示该属菌种对于有机磷杀虫剂的降解存在广谱性;肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumonia)、赤红球菌(Rhodococcus ruber)和Cupriavidus sp.为新发现的可降解毒死蜱和敌百虫的菌种。可降解溴氰菊酯的菌群中包括10个属,分别为:不动杆菌属(Acinetobacter)、克雷伯氏菌属、柠檬酸杆菌属(Citrobacter)、Stenotrophomonas、假单胞菌属、拟无枝酸菌属(Amycolatopsis)、红球菌属(Rhodococcus)、 Ancylobacter、Ochrobactrum和黄色杆菌属(Xanthobacter);其中优势的为不动杆菌属和克雷伯氏菌属种类;柠檬酸杆菌属、黄色杆菌属、拟无枝酸菌属、不动杆菌属、Ochrobactrum和Ancylobacter共6个属的菌种为首次报告的溴氰菊酯降解菌属。最后,在实验室条件下验证了筛选的降解菌的对3种菊酯类杀虫剂的降解效能,发现该菌群,从第2d开始到第8d降解率的趋势为持续增加,降解率在第8d时达到最高,分别为77%(联苯菊酯)、61%(溴氰菊酯)和74%(三氟氯氰菊酯),该菌群对菊酯类杀虫剂的降解存在广谱性。众所周知,疟原虫必须在按蚊体内经历一系列复杂的发育和繁殖过程,才可以感染人,按蚊肠道内的细菌可影响疟原虫的发育。本研究采用高通量测序技术,对现场采集的中华按蚊和雷氏按蚊(An. lesteri)肠道细菌宏基因组的组成进行测定和分析,结果可为深入阐明媒介按蚊-疟原虫-共生菌的相互关系奠定基础。取得的主要结果如下:本研究共检测了10个样本,包括孳生地的水样、中华按蚊幼虫和成虫(吸血与未吸血)和雷氏按蚊幼虫。稀疏曲线和Alpha多样性指数均提示测序深度充分,评估OTU的数量应接近实际情况。在蚊虫肠道内,不论是虫期还是种类,变形菌门(Proteobacteria)的丰度均为最高;水体中丰度高的门为厚壁菌门(Firmicutes39%)、拟杆菌门(Bacteroidetes34%)和变形菌门(25%)。在门水平,各样品间细菌丰度差异性比较的结果显示,吸血与未吸血成蚊间差异显著的门仅为变形菌门,水体与吸血成蚊、与幼虫间差异显著的门最多,为9个;在科水平,成虫与幼虫的菌群结构差异大于未吸血与吸血的成虫间,与水体比较时,发现还是蚊虫各期菌群结构差异小。对序列数大于500的属进行分析的结果显示,不动杆菌属、Thorsellia、布鲁氏属(Brucella)、泛菌属(Pantoea)和假单胞菌属出现在50%(含)以上的样品中,其中不动杆菌属在10个样品中均存在。
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