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目的探讨结直肠癌患者免疫系统中辅助性T淋巴细胞亚群(Th1细胞和Th2细胞)的变化,以及吗啡和不同浓度氯胺酮对结直肠癌患者Th1细胞和Th2细胞的影响。方法健康志愿者20例,结直肠癌患者20例,年龄45-65岁,BMI 18-25 kg/m2。清晨空腹下抽取受试者静脉血(健康志愿者10m L,结直肠癌患者20m L),用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞(PBMCs)。台盼蓝染色法检测细胞存活率大于95%。将健康志愿者每份血样分离出的PBMCs分为2组(n=20):对照组(P1组、C1组)加入等容积0.9%氯化钠。将结直肠癌患者每份血样分离出的PBMCs随机分为6组(n=20):吗啡组(M组,终浓度为50ng/m L);氯胺酮不同终浓度组(K1组、K2组和K3组,终浓度分别为25μM,50μM,100μM);对照组(P2组、C2组)加入等容积0.9%氯化钠。孵育0.5h后,分别向各组中加入佛波醇-十四酸酯-乙酸酯(PMA)和离子霉素2μL/mL及相对应浓度的吗啡、氯胺酮或0.9%氯化钠(P1组、P2组除外),P1组和P2组中均不加入PMA和离子霉素。各组细胞继续孵育。4h后收集细胞。采用三色荧光流式细胞技术(CD3+CD8-IFN-γ+标记为Th1细胞,CD3+CD8-IL-4+标记为Th2细胞)测定Th1细胞和Th2细胞数量比例,并计算二者比值(Th1/Th2)。结果在健康志愿者组中,加刺激剂组C1组与未加刺激剂P1组比较,Th1细胞和Th2细胞数量明显增加(均P<0.001)。在结直肠癌组中,加刺激剂组C2组与未加刺激剂P2组比较,Th1细胞和Th2细胞数量明显增加(均P<0.001)。在PMA和离子霉素刺激下,结直肠癌组中C2组与健康志愿者组中C1组相比,Th1细胞数量和Th1/Th2比值降低(均P<0.001),差异有统计学意义。结直肠癌M组与其对照组C2组比较,Th1细胞、Th1/Th2比值降低(均P<0.001),Th2细胞数量无明显变化(P=0.37)。与对照组C2组比较,结直肠癌K1组中Th1细胞、Th2细胞和Th1/Th2比值均无明显变化(P=0.57、0.71、0.81);K2组中Th1/Th2比值由1.63升高至1.71(P<0.01);K3组中Th1细胞、Th2细胞数量降低,Th1/Th2比值升高(均P<0.01)。随着氯胺酮浓度的增加,Th1/Th2比值不断增高(从1.64 25μM到1.71 50μM,从1.71 50μM到2.03 100μM,P值均<0.01)。结论结直肠癌诱导免疫应答,使Th1/Th2平衡向Th2偏移。在体外PMA和离子霉素的刺激下,小剂量氯胺酮对结直肠患者的Th1细胞数量,Th2细胞数量,Th1/Th2比值影响不大;镇痛浓度下吗啡和氯胺酮能抑制Th细胞分化,但吗啡降低Th1/Th2比值,氯胺酮增加Th1/Th2比值,且随着浓度的增加,氯胺酮对Th细胞分化的影响越大。本研究结果提示小剂量氯胺酮与吗啡联合应用在提高癌痛患者镇痛质量,减少其不良反应发生的前提下,并不会增加对免疫系统中Th细胞分化的抑制程度。